白鹤芋体胚高效快繁体系的建立及多倍体诱导研究

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本研究以白鹤芋‘Mojo’品种的花序及试管苗根茎为试验材料,通过对激素种类、激素浓度、AgN03浓度及营养水平等方面,开展白鹤芋体胚发生及器官发生的研究。利用秋水仙素、氨磺灵及氟乐灵对白鹤芋进行多倍体诱导,为今后白鹤芋多倍体育种及新品种的选育提供参考。主要研究结果如下:(1)白鹤芋‘Mojo’品种花序胚性愈伤诱导最适配方为MS+TDZ 5.0 mg·L-1 + NAA 0.2 mg·L-1,诱导率达64.97%。根茎胚性愈伤诱导最佳配方为MS+2,4-D 4 mg·L-1 +TDZ 0.5 mg·L-1,诱导率为87.44%;根茎器官发生型愈伤诱导最佳配方为MS+2,4-D 1mg·L-1+TDZ 0.5 mg·L-1,诱导率为92.33%。根茎是胚性愈伤诱导的最佳外植体。(2)愈伤组织增殖阶段,2mg·L-1 AgNO3作用时,愈伤组织增殖效果及生长状态最佳,增殖系数达3.08。(3)胚状体诱导最佳激素配方为 MS+6-BA 1 mg·L-1 + TDZ 0.2 mg·L-1 +NAA 0.2 mg·L-1,诱导率为68.32%;体胚萌发最佳营养和激素水平为1/2MS+TDZ 0.1 mg·L-1 + IBA 1.0 mg·L-1,萌发率为70.54%;植株再生的最佳配方为MS+6-BA 0.8 mg·L-1 +IBA 0.2 mg·L-1,再生率为89.34%。植株最佳生根配方为 MS+AC 1 g·L-1+NAA0.2 mg·L-1。(4)白鹤芋体胚形态形成过程与单子叶植物胚的形态形成过程类似,主要分为以下几个阶段:胚性细胞、球形胚、椭圆形胚、盾形胚,子叶型胚、成熟体细胞胚。(5)染色体制片技术优化,早上8:45-9:15取材,用0.002 mol·L-18-羟基喹啉或0.07 mmol·L-1放线菌酮预处理4 h所得的染色体制片效果最佳。白鹤芋‘Mojo’品种的染色体数目为2n=2x=30,为二倍体。(6)以白鹤芋‘Mojo’品种的体胚及幼芽为试验材料,研究不同浓度的秋水仙素、氨磺灵及氟乐灵溶液对体胚及幼芽四倍体的诱导情况。得出白鹤芋体胚四倍体诱导的最佳方法为0.08%秋水仙素处理15 d。幼芽四倍体诱导的最佳方法为100 mg·L-1氟乐灵处理5 d。幼芽的诱导率要比体胚的高,幼芽的多倍体诱导较体胚的更容易些。(7)对白鹤芋的四倍体在形态学、染色体数目和气孔进行鉴定。发现四倍体植株较二倍体植株生长健壮,叶片宽大厚实,叶色深绿,叶型指数变小,叶型更加匀称,株型紧凑。白鹤芋二倍体的染色体数目为2n=2x=30,四倍体的染色体数目为2n=4x=60,染色体数目增加了一倍。四倍体气孔明显比二倍体的大,而且同等面积上的气孔数减少。
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