泰乐菌素（Tylosin,TYL）和替米考星（Tilmicosin,TIM）均属于大环内酯类（Macrolides,MALs）药物,是禽畜专用抗生素。因其肠道吸收好,体内扩散快,血药浓度高,在临床上主要用于治疗和预防由支原体、金黄葡萄球菌、化脓杆菌等引起的各种呼吸道、肠道、生殖道和运动系统感染。但如果长期滥用或不合理使用这类药物,易引起过敏反应、听力减退,甚至肝肾的严重损害,其在动物性食品中的残留会对消费者健康造成威胁。因此,对这两种抗生素残留检测和监管显得尤为重要。本研究建立了可同时检测牛奶、猪肉、鸡蛋样品中TYL和TIM的胶体金、乳胶微球、时间分辨荧光微球侧流免疫层析检测方法,旨在实现样品快速检测,为动物性食品中MALs的残留监控提供技术支撑。取得的主要结果如下:（1）胶体金免疫层析方法的建立:为了获得高检测性能的金标抗体,对标记的胶体金的颗粒大小、标记的p H值、抗体稀释液、包被条件等进行了优化进行了调节;并对样品处理以及样品垫工艺进行了较为全面的探讨以适应不同样品的检测需求。方法优化后的检测性能如下:牛奶样本无需处理,直接检测,猪肉和鸡蛋样本简单提取稀释后即可检测,检测结果可在5 min内获得。对于牛奶、猪肉、鸡蛋样品中残留TYL Cut-Off值分别为:6 ng/m L、15 ng/g、10 ng/g,对TIM的Cut-Off值分别为6 ng/m L、8 ng/g、4 ng/g。（2）乳胶微球免疫层析方法的建立:本研究应用表面修饰有功能化羧基的蓝色乳胶微球,优化了羧基活化和抗体偶联的p H值、抗体稀释液及相应的时间等重要技术参数;为适应样品的检测需求,同样对样品垫工艺及样品的前处理方式进行了系统的调节。此方法对于牛奶、猪肉、鸡蛋样品中残留TYL及TIM的Cut-Off值分别为:4 ng/m L、6 ng/g、8 ng/g和8 ng/m L、15 ng/g、8 ng/g,样品前处理与胶体金方法一致,检测结果可在5 min内获得。本研究也是首次提出用于检测TYL和TIM的乳胶微球侧流免疫层析法。（3）时间分辨荧光微球免疫层析方法的建立:时间分辨荧光微球采用stoke位移大、荧光半衰期长的稀土离子做标记物,表面修饰有功能化羧基,可与抗体共价偶联为荧光探针。本研究着重优化羧基活化效率、抗体标记用量、p H值、离子强度、封闭时间,特别是针对样品垫配方的表面活性剂、离子浓度等关键参数进行了优化。该方法对于牛奶、猪肉、鸡蛋样品中残留TYL及TIM的Cut-Off值分别为:2 ng/m L、3ng/g、6 ng/g和4 ng/m L、6 ng/g、6 ng/g,检测时间5 min。（4）三种免疫层析方法的评价:将建立的三种免疫层析方法在灵敏度、稳定性、准确度、研发成本、用户操作简便性等方面进行多维度对比。结果显示:时间分辨荧光微球免疫层析法的灵敏度最优,三者的稳定性、准确度基本一致,但胶体金和乳胶微球免疫层析方法因结果可视,操作更简便,其中胶体金免疫层析方法的研发成本最低。因此,用户可根据需求进行选择。相比于其它文献局限于检测一种或一类样品,本方法检测样本涵盖了肉、蛋、奶类等较为常见的动物性食品。最后,采用建立的三种免疫层析方法同时检测40份牛奶盲样,并用LC-MS/MS方法进行确证。结果表明三种方法的检测结果与LC-MS/MS方法的检测结果的相关性良好,未出现假阳性或假阴性结果,说明我们建立的方法可靠且准确,可为动物性食品中MALs现场筛查提供多种技术支撑。