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口腔黏膜白斑(oral leukoplakia,OLK)是口腔黏膜上的白色斑块或白色斑片,不能以临床和组织病理学的方法诊断为其他任何疾病者。OLK恶变率高,可恶变成严重危害人类生命健康的口腔黏膜鳞状细胞癌(oral squamous cellcarcinoma,OSCC),其中非均质型白斑恶变率约为13%-17.5%,甚至在某些地区OLK恶变率可高达50%-70%。口腔黏膜鳞状细胞癌是世界十大肿瘤之一,在全身恶性肿瘤中排第六位。有研究结果显示,口腔鳞状细胞癌中有17%-35%是由口腔白斑恶变而来,因此研究口腔白斑恶变分子机制,筛选恶变相关蛋白,寻找恶变分子标志物,对口腔白斑恶变的早期发现、早期诊断及治疗,有效改善预后具有重要的科学意义和临床应用前景。目的:本项研究通过蛋白质组学检测技术筛检口腔黏膜白斑恶变相关蛋白,并分析OLK恶变前后差异蛋白的相关信息,为深入研究口腔黏膜白斑恶变分子机制,探寻口腔白斑恶变分子标志物及关键治疗靶点提供重要的研究基础。方法:本实验采用我们自行建立的口腔黏膜白斑恶变细胞模型,即人口腔黏膜白斑细胞系DOK及其诱导恶变细胞系口腔鳞状上皮癌细胞OSCC-B+D为实验对象,运用相对定量蛋白质组学方法高通量筛检DOK及OSCC-B+D细胞间蛋白质组的表达差异。首先采用稳定同位素二甲基标记技术,将CH2O和CD2O分别标记进入人口腔白斑细胞DOK-G及其恶变细胞OSCC-B+D的蛋白酶解肽段,然后将两种细胞样品混合通过高效液相色谱进行分离,最后样品进入具有高灵敏性、可微量上样的Orbitrap Elite质谱仪进行多肽检测,并通过MaxQuant软件(v1.1.2.5),在IPIHuman.(v3.87)数据库中对质谱检测结果进行蛋白质鉴定。结果:口腔黏膜白斑细胞DOK及其恶变细胞OSCC-B+D样品经过HPLC-MS/MS检测分析后,共鉴定出1459个蛋白,取三次重复实验的共同鉴定结果,筛检出931个蛋白。对获得的筛检结果进行进一步过滤,控制相对标准偏差RSD<35%,最终共获得621个蛋白。分析和比较DOK及其恶变细胞OSCC-B+D蛋白质组的表达变化,筛选出197个恶变前后的差异蛋白,其中125个蛋白在恶变后呈显著性上调表达(平均氘氢比值>2),72个蛋白在恶变后呈显著性下调表达(平均氘氢比值<0.5)。我们采用uniprotKB数据库将197个差异蛋白按照其细胞内定位,蛋白分子功能及其参与的生物学过程进行分类分析,获得差异蛋白相关信息。依据细胞内定位信息,提示差异蛋白中定位于细胞质(cytoplasm)和细胞核(nucleus)的蛋白最多,均占22%,其他依次递减定位于线粒体(mitochondrion,12%),细胞膜(plasma membrane,11%),内质网(endoplasmic reticulum,8%),integralto membrane(7%);依据蛋白分子功能信息,提示DNA结合(DNA binding)蛋白最多,约占9%,其次是RNA结合(RNA binding)蛋白,约占6%,其他依次递减为载体活性(transporter activity)蛋白(5%),GTP酶调节活性(GTPase activity,3%)蛋白,转录监管活性(transcription regulator activity,2%)蛋白等;依据参与的生物学过程信息,提示参与核糖核酸/脱氧核糖核酸/核苷酸/核小体的代谢调节(regulation of RNA/DNA/nucleotide/nucleosome metabolic process)蛋白最多约占23%,其次为蛋白代谢(protein metabolism)约占12%,其他依次递减为转运(transport,11%)蛋白,细胞生长(cell growth,9%),细胞凋亡(apoptosis,7%),信号转导(signal transduction,2%)以及免疫反应(immuneresponse,2%)相关蛋白。结论:本项研究通过高通量筛检口腔黏膜白斑细胞恶变前后的差异蛋白质组,发现197个蛋白质呈差异表达。根据差异蛋白相关信息,初步推测OLK恶变发生的可能机制:参与OLK恶变发生的蛋白大多定位于细胞核与细胞质中,DNA/RNA结合蛋白及参与核糖核酸/脱氧核糖核酸/核苷酸/核小体代谢调节的蛋白质在OLK恶变进程中发挥重要作用,DNA/RNA功能及代谢异常可能是OLK恶变的重要机制。本项研究为进一步深入细致地探索OLK恶变分子机制,筛选口腔黏膜白斑恶变分子标志物和关键治疗靶点提供有力的研究基础和科学依据。目的:通过对大学生进行口腔健康检查,了解这一人群的龋病患病情况,为制订口腔保健治疗方案提供科学依据,同时充实大学生龋病流行病学资料。方法:参照WHO口腔健康调查基本方法以及第三次全国口腔健康流行病学调查方案制定口腔检查表格,对大连理工大学570名大学生进行龋齿患病情况研究,调查内容包括龋均、患龋率等,以视诊结合探诊的方式检查后将结果记录在表格内。结果:570名大学生患龋率为58.07%,龋失补牙数共1013颗牙(龋牙数766颗,因龋失牙数10颗,因龋补牙数237颗),龋均为1.78±2.335,龋齿充填率为23.40%。男生和女生在患龋率分别为54.3%和73.5%,两者差异具有统计学意义(P<0.05);男生和女生的龋均分别为1.54±2.130和2.73±2.845,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。城市生源和农村生源学生的患龋率分别为62.1%和53.2%,两者差异具有统计学意义(P<0.05);城市生源和农村生源的龋均分别为1.95±2.322和1.56±2.389,两者差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄分组的患龋率分别为58.5%(18-20岁)、54.9%(21-23岁)、64.3%(>24岁),三者差异无统计学意义(P>0.05);不同年龄分组的龋均分别为1.72±2.108(18-20岁)、1.63±2.325(21-23岁)、2.36±2.968(>24岁),三者组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。对不同年龄分组的龋均进行两两比较后显示18-20岁年龄段与21-23岁年龄段的龋均无统计学差异,但二者与>24岁年龄组均有统计学差异,随着年龄增长,龋均也随之增加。进一步对患龋牙位进行分析比较之后,发现磨牙患龋水平明显高于其他牙齿,其中下颌磨牙患龋率高于上颌磨牙,二者具有统计学差异(P<0.05)。结论:通过本次龋病流行病学调查,结果表明大学生龋齿患病率较高,但龋齿充填率较低。本次调查显示大学生的龋病流行特点为:龋齿患病率女性高于男性、城市高于乡村;龋均水平女性高于男性、24岁以上年龄组高于18-23岁年龄组。患龋牙位的流行病特点为:磨牙患龋水平高于其他牙齿,下颌磨牙患龋水平高于上颌磨牙。