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目的:探索与肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）发生发展相关的基因在肝癌细胞中的差异性表达及其启动子在肝癌细胞HepG2与正常肝细胞HL-7702中的启动活性差异,从而获得肝癌差异性表达基因及可以介导基因在肝癌细胞中靶向性表达的启动子,为进一步进行肝癌差异性表达基因启动子中的关键DNA元件（DNA motif）的分析及功能研究等奠定基础。方法:1.查阅文献并结合生物信息学分析预测肝癌差异性表达基因及其启动子序列。2.采用qRT-PCR的方法检测筛选获得的肝癌差异性表达基因在HepG2细胞与HL-7702细胞中的表达水平。3.提取肝癌细胞HepG2的基因组,对肝癌差异性表达基因的启动子区进行测序和分析。4.合成测序后的启动子序列并在两端加上酶切位点,然后将各启动子插入到含有荧光素酶表达基因的启动子活性检测质粒pGL3-Basic中;重组质粒经转化至感受态DH5α大肠杆菌细胞中,并筛选获得单克隆。小提质粒后经琼脂糖凝胶电泳检测酶切后的质粒,提取的质粒通过测序进一步鉴定。5.将含有各待测启动子的荧光素酶报告载体质粒与海肾荧光素酶报告载体质粒p RL-TK共转染到HepG2细胞和HL-7702细胞中;然后通过双荧光素酶报告基因实验检测目的启动子的启动活性。6.通过生物信息学分析初步探索肝癌相关性表达基因启动子区中可能的DNA Motif。结果:1.TCGA数据库分析结果表明丛生蛋白（Clusterin,CLU）,分泌蛋白DKK1（Dickkopf-1,DKK1）,高尔基体跨膜蛋白-73（Golgi protein-73,GP73）,顶体蛋白酶原结合蛋白（Acrosin-binding protein,ACRBP）,甲胎蛋白（Alpha-foetoprotein,AFP）在肝癌组织中差异性高表达。并根据生物信息学分析获得五种基因的启动子区域（-700/+300）。2.qRT-PCR结果表明:基因CLU,DKK1,GP73,ACRBP和AFP在HepG2中的mRNA相对表达量均高于HL-7702中的表达量,其中CLU,DKK1,GP73,ACRBP和AFP在HepG2中的mRNA相对表达量依次为HL-7702中的9.38倍,37.33倍,17.88倍,2.69倍,2.39×10~6倍,且差异具有统计学意义（P＜0.05）。3.启动子测序结果表明肝癌细胞HepG2中基因AFP,GP73和ACRBP的启动子序列与Genebank中的序列对比发现存在突变位点;基因CLU与DKK1启动子序列与Genebank中一致。4.将合成的测序后的启动子序列插入到pGL3-Basic质粒中,得到目的基因启动子表达质粒:pGL3-CLUP（pGL3-CLU Promoter）,pGL3-DKK1P,pGL3-GP73P参考,pGL3-GP73P突变,pGL3-ACRBPP参考,pGL3-ACRBPP突变,pGL3-AFPP参考和pGL3-AFPP突变。将提取得到的表达质粒进行酶切后电泳:表达质粒pGL3-CLUP,pGL3-DKK1P,pGL3-GP73P参考,pGL3-GP73P突变,pGL3-ACRBPP参考,pGL3-ACRBPP突变,pGL3-AFPP参考和pGL3-AFPP突变经单酶切后为一条电泳条带,长度为6000bp左右;双酶切后的质粒为两条电泳条带,一条为5000bp左右,另一条为1000bp左右,大小与质粒和启动子大小一致。测序结果也表明目的启动子序列已插入到pGL3-Basic质粒启动子区。5.通过双荧光素酶报告基因实验检测发现,表达质粒pGL3-CLUP,pGL3-DKK1P,pGL3-GP73P参考,pGL3-GP73P突变,pGL3-ACRBPP参考,pGL3-ACRBPP突变的启动子在HepG2中的启动活性均比HL-7702中的高。其中pGL3-GP73P参考和pGL3-GP73P突变在HepG2细胞中的启动活性依次是HL-7702中的18.757和10.822倍,且差异具有统计学意义。pGL3-ACRBPP参考和pGL3-ACRBPP突变在HepG2细胞中的启动活性依次是HL-7702中的13.159和10.286倍,且差异具有统计学意义。并且发现GP73和ACRBPP启动子的突变位点对启动子的活性具有降低作用,具体机制有待进一步研究。表达质粒pGL3-AFPP参考和pGL3-AFPP突变分别转染到HepG2细胞和HL-7702细胞后发现,启动子的启动活性均很差且不稳定,无法进行统计学分析。6.通过MEME在anr模式下对表达质粒:pGL3-CLU,pGL3-DKK1,pGL3-GP73参考,pGL3-GP73突变,pGL3-ACRBP参考和pGL3-ACRBP突变进行初步探索,得到9个Motif,其中发现2个共同Motif。结论:基因CLU,DKK1,GP73,ACRBP和AFP在肝癌细胞HepG2中差异性表达;筛选获得五种基因的启动子;GP73和ACRBP的启动子可介导基因在肝癌细胞HepG2中靶向性表达并具有较好的启动活性;并且发现启动子中的突变位点会影响启动子活性。