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1大鼠慢性胰腺炎模型的建立
1.1目的：腹腔内注射不同剂量的DDC，观察大鼠血清淀粉酶的变化、并发症、死亡率及胰腺病理改变，探索最佳的造模剂量。
1.2方法：雄性Wistar大鼠80只，按照随机数字表分为阴性对照组(NC组，n=16)和DDC500mg/kg组(CPⅠ组，n=16)，DDC 700mg/kg组(CPⅡ组，n=16)，DDC900mg/kg组(CPⅢ组，n=16)，DDC400mg/kg 10％递增组(CPⅣ组，n=16)。隔日腹腔内注射相应剂量的DDC，NC组则隔日腹腔内注射生理盐水，以上各组分别在6d、12d、24d、32d处死大鼠(n=4)，取血标本及组织标本，检测血清淀粉酶的变化，用HE染色、Masson染色观察胶原纤维面积百分比的变化，观察大鼠并发症及死亡发生率。
1.3结论：用700mg/kg，隔日腹腔内注射DDC，持续15次可以制成大鼠慢性胰腺炎胰腺纤维化的模型，腺泡间及小叶周围有胶原纤维增生，及单核细胞浸润，腺泡坏死不明显，导管及胰岛无明显病理学改变。血清淀粉酶在一周左右高于正常，随后逐渐降至正常。在模型形成过程中，可以出现眼眶出血及鼻出血、震颤、尿失禁等并发症。
2.OM治疗CP的量效关系
2.1目的：用不同剂量的OM对CP大鼠进行干预，检测其对血清纤维化指标、胶原纤维增生面积及α-SMA表达的影响，从而观察其对胰腺纤维化的治疗效果及量效关系。
2.2方法：健康雄性Wistar大鼠，28只。随机分为阴性对照组(NC组，n=4)、模型组(CP组，n=4)、CP+OM 25mg/kg(OMⅠ组，n=4)、CP+OM 50mg/kg(OMⅡ组，n=4)、CP+OM100mg/kg(OMⅢ，n=4)、CP+OM200mg/kg(OMⅣ组，n=4)、CP+OM 400mg/kg(OMV组，n=4)7组。NC组腹腔注射生理盐水2ml，隔日一次，连续15次，模型组以700mg/kg的剂量腹腔注射DDC，隔日一次，连续15次，OM干预组在隔日腹腔注射DDC的同时分别采用25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg五个剂量每日腹腔注射OM，一个月后处死动物。用ELISA法检测血清中HA、LN、PCⅢ的浓度。在显微镜下观察标本四角及中央5个视野中的面积百分比，测定每一视野中胶原含量，以纤维占视野面积的百分比表示胶原含量，取平均值进行统计分析。用Western blot方法检测不同剂量OM治疗组胰腺组织α-SMA的表达情况，采用IMAGE PRO PLUS图像分析软件分析α-SMA条带与β-actin累积光密度值的比值。
2.3结果：
2.3.1血清学纤维化指标的检测：
HA在血清中的含量，NC(98.77±27.81)μg/L、CP(278.25±45.77)μg/L、OMⅠ(295.67±61.61)μg/L、OMⅡ(181.67±27.54)μg/L、OMⅢ(170.12±31.12)μg/L、OMⅣ(201.01±18.33)μg/L、OMⅤ(185.01±29.21)μg/L。NC组显著低于其余各组(P<0.05)；CP组与OMⅠ比较无显著性差异(P>0.05)，而较其余OM干预组高(P<0.05)。OMⅡ、OMⅢ、OMⅣ、OMⅤ各组间比较无显著差异(p>0.05)。
LN在血清中的含量，NC(46.73±9.92)μg/L、CP(163.59±29.23)μg/L、OMⅠ(157.04±31.43)μg/L、OMⅡ(95.27±38.66)μg/L、OMⅢ(78.17±30.77)μg/L、OMⅣ(94.77±25.31)μg/L、OMⅤ(95.11±19.24)μg/L。NC组较CP组、OMⅠ低(P<0.05)，与其余各组无显著差异(P>0.05)。CP组与OMⅠ比较无统计学差异(P>0.05)，但高于其余各组(P<0.05)。OMⅡ、OMⅢ、OMⅣ、OMⅤ各组间比较无显著差异(P>0.05)。 PCⅢ在血清中的含量，NC(12.91±3.51)μg/L、CP(51.13±5.88)μg/L、OMⅠ(41.01±14.12)μg/L、OMⅡ(34.67±9.07)μg/L、OMⅢ(32.93±4.30)μg/L、OMⅣ(33.33±7.07)μg/L、OMV(34.10±8.89)μg/L。其它组均高于NC组(P<0.05)；CP组与OMⅠ比较无显著性差异(P>0.05)，而高于OMⅡ、OMⅢ、OMⅣ、OMⅤ(P<0.05)。OMⅡ、OMⅢ、OMⅣ、OMⅤ各组间比较无显著差异(P>0.05)。
2.3.2胰腺组织病理学改变Masson染色中，胶原纤维面积百分比NC(2.65±0.393)、CP(40.34±7.17)、OMⅠ(36.73±2.84)、OMⅡ(27.88±3.48)、OMⅢ(13.35±4.06)、OMⅣ(21.97±6.85)、OMⅤ(21.56±3.67)。NC组胶原纤维面积百分比低于其余各组(P<0.05)；CP组与OMⅠ比较无显著性差异(P>0.05)，而高于OMⅡ、OMⅢ、OMⅣ、OMⅤ(P<0.05)。在此四个剂量中，OMⅢ胶原纤维面积百分比低于其余三组OM干预组(P<0.05)。OMⅡ、OMⅣ、OMⅤ之间无统计学意义(P>0.05)。
2.3.3不同剂量OM对胰腺组织中α-SMA的影响α-SMA与β-actin的相对表达量NC(0.78±0.06)、CP(1.16±0.03)、OMⅠ(1.12±0.03)、OMⅡ(0.99±0.05)、OMⅢ(0.97±0.02)、OMⅣ(1.05±0.02)、OMⅤ(1.06±0.03)。在NC组α-SMA相对表达量低于其余各组(P<0.05)；CP组与OMⅠ比较无统计学差异(P>0.05)，而高于其余各组(P<0.05)；OMⅡ与OMⅢ、OMⅣ比较无统计学意义(P>0.05)；但低于OMⅤ(P<0.05)；OMⅢ低于OMⅣ、OMⅤ(P<0.05)；OMⅣ与OMⅤ比较无统计学差异(P>0.05)。 2.4结论：
OM可以降低血清中HA、LN、PCⅢ；OM可以通过减少胰腺组织内胶原的生成及α-SMA的表达抑制胰腺纤维化的发展，OM治疗CP的最佳剂量为100mg/kg。
3.OM对CP大鼠胰腺组织TGF-β1RⅠ的影响
3.1目的：观察OM干预CP大鼠后胰腺组织TGF-β1RⅠ的表达变化，从而初步探索OM对CP的治疗机制。
3.2方法：雄性Wistar大鼠40只，按照随机数字表分为阴性对照组(NC组，n=10)：以300mg/kg隔日腹腔内注射生理盐水；模型组(CP组，n=10)以700mg/kg隔日腹腔内注射DDC；OM治疗组(OT组，n=10)以700mg/kg隔日腹腔内注射DDC，一周后开始每日腹腔注射OM 100mg/kg。OM预防组(OP组，n=10)依照模型组方法注射DDC的同时每日腹腔内注射OM 100mg/kg。到30天时停止注射DDC，但仍继续注射OM。将上述四组分别依20d、40d处死大鼠(n=5)，取组织标本用Masson染色法观察胶原纤维面积百分比，应用Western blot技术检测TGF-β1RⅠ的变化，采用IMAGEPRO PLUS图像分析软件分析胶原纤维量的变化及TGF-β1RI条带与β-actin的累积光密度值(IOD)的比值。
3.3结果：
3.3.1胰腺组织的病理结果Masson染色可见胶原纤维面积百分比在20d时CP组(22.54±4.45)、OP组(13.16±1.84)、OT组(19.58±2.78)较NC组(2.45±0.24)高(P<0.05)，OP组与OT组较CP组降低(P<0.05)；在40天时CP组(35.14±3.27)较OP组(25.14±3.67)、OT组(28.68±2.55)、NC组(3.0±0.32)高(P<0.05)，NC组低于其余各组(P<0.05)，CP组与OT组在40天时的胶原纤维面积百分比较20天时增高(P<0.05)。
3.3.2胰腺组织中TGF-β1RI的相对含量的变化在20d与40d，CP(0.81±0.04/1.06±0.02)、OT(0.60±0.06/0.78±0.09)、OP(0.73±0.05/0.76±0.06)各组的TGF-β1RI相对表达量高于NC组(0.47±0.08/0.49±0.07)(P<0.05)，OT组与OP组低于CP组(P<0.05)；在20d时，OT组低于OP组(P<0.05)。
3.4结论：
Wistar大鼠慢性胰腺炎胰腺纤维化发生过程中，血TGF-β1RI蛋白表达上调，OM干预后可下调TGF-β1RI蛋白的表达，可能是其作用机制之一。