目的本论文的研究的内容是,探索二氢杨梅素和盐酸千金藤碱这两种中药成分,应用这两种成分来影响我们体外分离培养出的人牙周膜细胞群,观察这两种中药成分对于我们人牙周膜细胞增殖、总蛋白及碱性磷酸酶活性的影响。探讨此两种中药成分对于预防及治疗牙周疾病的可能性,为科学合理的推进该两种药的有效成分在牙周相关疾病的应用提供理论依据。方法对于牙周膜细胞群的原代培养的方法,采用的是盖玻片覆盖组织块法。我们观察这批培养出的细胞的状态,利用倒置显微镜观察培养出的细胞的形状及生长情况;使用MTS法绘制细胞生长的曲线,分别在细胞第1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天以及8天测牙周膜细胞的OD值,绘制MTS曲线,观察曲线的走势,分析细胞的增长;使用免疫组织化学法,目的是来确定所培养出来的细胞是否是来自于间充质,而没有其他组织的细胞混杂进去;对培养出的细胞进行成骨诱导21天,使用茜素红染色,观察经过诱导过后的所培养出来的细胞是否具有矿化结节,用来说明所培养的细胞经矿化诱导后可以成骨份化;采用含二氢杨梅素浓度为80μmol/L、40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L的DMEM培养液,以及含盐酸千金藤碱浓度为10μmol/L、8μmol/L、6μmol/L、4μmol/L、2μmol/L的DMEM培养液,分别采用MTS法、考马斯亮蓝染色法、ALP碱性磷酸酶检测试剂盒检测后观察不同浓度二氢杨梅素、盐酸千金藤碱对牙周膜细胞群增殖活性、总蛋白浓度及碱性磷酸酶活性的影响。用MTS法使两种药物不同浓度分别作用于牙周膜细胞群24h、48h以及72h,观察细胞的增殖情况;采用考马斯亮蓝染色法,将两种药物不同浓度分别作用于牙周膜细胞群72h,测量牙周膜细胞的总蛋白含量是否有变化;将不同浓度的该两种药物分别作用于牙周膜细胞,应用碱性磷酸酶试剂盒,测量药物作用于牙周膜细胞后,其碱性磷酸酶的活性有否增高。结果1、电子显微镜下观察,活性较好的组织块,在镜下观察可见组织块通体呈金黄色,而活性较差,或者没有贴壁的组织块则镜下观可见组织块漂浮或者发黑。对于活性较好的组织块,到第5天至10天,会有细胞从组织块中游出,开始爬出排列紊乱的细胞,没有任何规则,散布在活性较高的组织块附近,其梭型、胞体丰满,两头尖尖,与其他细胞相连,此时细胞具有了细长的胞体凸起。在细胞的正中央,或者附近,可以看到我们的胞核,它的核是圆形或者椭圆的形状没有完全的规则和统一。MTS测定显示牙周膜细胞群它的增殖绘制出的曲线规律是S形状;其免疫组化结果:第3代PDLP其强阳性表达的为波形蛋白,阴性的表达为角蛋白;PDLP成骨诱导21天后显示有矿化结节的形成,而没有经过诱导的空白对照组仅有少数结节,多数没有,并且茜素的红染色呈阳性,且肉眼即可分辨。2、不同浓度的二氢杨梅素以及盐酸千金藤碱对PDLP增殖及总蛋白的影响(1)MTS结果显示:含二氢杨梅素80μmol/L、40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L的DMEM全培以及含盐酸千金藤碱10μmol/L、8μmol/L、6μmol/L、4μmol/L、2μmol/L的DMEM全培分别作用于PDLP 24 h、48 h、72 h后,结果显示各浓度组以及均可促进牙周膜细胞的增殖(P<0.05)。(2)总蛋白量检测:对于二氢杨梅素以及盐酸千金藤碱作用于PDLP,PDLP的总蛋白实验组对于对照组,有统计学意义(P<0.05),但是各实验组之间的浓度没有统计学意义(P>0.05)。3、二氢杨梅素和盐酸千金藤碱碱性磷酸酶测试结果二氢杨梅素以及盐酸千金藤碱这两种药物实验组相对于对照组来说,均高于对照组(P<0.05)。