目的：探讨体外长期培养人骨髓间充质干细胞在不同时相的生物学特性的变化,为干细胞的体外安全性评估提供可靠的研究依据。方法：采用密度梯度离心、贴壁培养相结合的方法分离hBMSCs,进行长期体外培养。在不同培养时相,采用相差显微镜记录hBMSC的形态变化,并记录不同代数的细胞传代所需时间,同时应用流式细胞技术检测不同培养时相的细胞表面标志抗原表达变化和细胞周期变化。结果：采用密度梯度离心、贴壁培养相结合的方法成功分离出hBMSCs,体外长期培养并追踪观察了25代,共248天。原代细胞培养早期(第15代之前),细胞的各项指标相对稳定；而培养后期,细胞形态、增殖速度、细胞表面标志抗原表达均发生改变,表现为：生长速度减慢；CD44、CD90表达明显下降；处于静止期的细胞显著减少,处于活跃增殖期的细胞比例显著增加,凋亡细胞数量明显增加。结论：体外长期培养人骨髓间充质干细胞,随着体外培养时间的增加,细胞的生物学性状发生改变,逐步失去干细胞特性。本研究为干细胞体外安全性的评估提供了研究依据。