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本研究以红金秋、延光梨等6个梨属及红金秋×苹果梨(论文中将供试用的红金秋×苹果梨杂交单株21株简称为1号~21号)的F1代杂种群体21株为试材,应用RAPD技术,对其进行了品种鉴定和分类地位的研究。结果表明:采用改良CTAB法在提取部分梨基因组DNA过程中表现最好且纯度最高;SDS-CTAB法存在大量的降解片段,DNA的获得率不高;经显著性方差分析,采用改良SDS法提取的各梨品种DNA产率均显著优于其他方法,但纯度较低;高盐低pH值法产率和纯度均最低且完整性均不理想。本实验最终采用CTAB改良法快速提取到了较高质量苹果梨杂交后代基因组总DNA用于RAPD扩增,并在RAPD反应中筛选出17个10碱基随机引物,它们的多态性百分率大多在76.07%以上。确定了RAPD-PCR苹果梨杂交后代最适反应体系为:总反应体系为25ul,其中模板DNA浓度为135ng/μL,引物浓度为15pmol,dNTP浓度为1.5mol/L,Mg2+浓度为1.5 mmol/L及Taq DNA聚合酶浓度为1.0 U,其余用重蒸馏水补充。扩增程序为:预变性94℃5min,变性94℃1min,退火温度40℃1min,延伸72℃1.5min,共40个循环;72℃最终延伸5min。建立了27个样品的指纹图谱。找到了4个样品的特征标记。27个样品中的20个样品可以用一个引物的两条带和其它样品区分开。对供试苹果梨杂交后代及其相关品种27株进行了RAPD扩增,根据遗传距离进行了聚类分析,以遗传距离0.30为结合线,将供试样品分成了5类。27个样品的遗传距离范围在0.10~0.46之间,以遗传距离0.30为结合线,将供试样品分成了5类:第一类全部是苹果梨杂交后代,包括:红×苹2号、3号、5~21号,共19个单株;第二类包括红金秋、红×苹1号、4号、苹果梨,说明红×苹1号和4号与苹果梨亲缘关系最近,继承苹果梨的基因较多,其他杂交后代继承红金秋的基因较多;红金秋是大香水和苹果梨的杂交后代,从图11中看出红金秋与苹果梨关系较近,说明红金秋本身遗传了更多的苹果梨的基因;第三类是大香水;第四类是小香水;第五类包括延光梨和东宁5号梨。