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抗菌肽(Antibacterial peptides，简称ABP)是生物细胞特定基因编码产生的一类小分子肽，是宿主防御病原微生物入侵的重要分子屏障，其生成和释放是机体炎症反应的组成部分。抗菌肽具有广谱的抗微生物及抗肿瘤活性，且对正常哺乳动物和昆虫细胞无明显的毒副作用。Hcpcidin是一种由肝脏合成的富含半胱氨酸的小分子肽。在动物中，其基因序列和结构具有高度进化保守性，序列均由信号肽、前域和成熟肽三部分组成。与其他抗菌肽不同，hepcidin具有抗菌活性的同时，在调解铁的代谢方面发挥着重要作用。本研究通过构建鲈鱼头肾cDNA文库，筛选抗菌肽基因，并进行体外原核表达。获得如下结果：
构建了海鲈头肾cDNA文库。以海鲈头肾为材料，提取并分离出mRNA，合成cDNA双链后，分级分离收集500bp～2000bp及以上的cDNA片段，构建了λZAPExpress表达型cDNA文库。初级文库的容量为7x 105个重组子，扩增文库的滴度达到1×1012pfu/mL，随机挑选重组克隆的插入片段在500bp～2000bp之间。根据已发表的hepcidin序列的保守区域设计特异性引物，用PCR法扩增文库，获得了海鲈hepcidin抗菌肽编码区序列，同已报道的海鲈抗菌肽序列(GenBank登录号为AY604195.2)相似性为100％。该cDNA文库的构建为分离和筛选抗菌肽及其它免疫相关基因奠定基础。
根据克隆得到的鲈鱼抗菌肽hcpcidin成熟肽序列，考虑到原核表达时大肠杆菌对密码子的偏好性，设计并合成了2条反向互补的84bp的成熟肽核酸片断，采用两链94℃变性室温退火法，得到成熟肽双链。Nco I/Xho I酶切，构建了pET32a-trx/hepcidin原核表达载体并作测序验证。将正确构建的融合蛋白表达载体转入硫氧还蛋白还原酶(trxB)缺陷型的大肠杆菌AD494(DE3)，以IPTG诱导表达，作Tricine-SDS-PAGE分析表达情况。结果表明该trx/hepcidin融合蛋白表达量在14h内与诱导时间成正相关；以可溶蛋白和包涵体两种状态分别存在于超声波破碎菌体后得到的上清和沉淀中。将超声破碎菌体收集的上清经过金属鏊合层析纯化，脱盐透析后，用肠激酶去除融合部分的trx标签，获得分子量约为2.3kDa的鲈鱼抗菌肽，与预测的大小相符；用此hepcidin蛋白检测抗菌活性，显示其对革兰氏阴性的大肠杆菌有抑制作用，对革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌未显示抗菌活性。该实验结果为进一步研究hepcidin的功能及开发应用hepcidin等奠定了良好的基础。