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发动蛋白(dynamin)是一个大的GTP酶,它参与了众多的细胞学进程,例如网格蛋白介导的胞吞作用、膜的重建、动力蛋白的募集以及动力蛋白介导的囊泡运动。一些发动蛋白的同源染色体以及亚型在形成细胞不平衡性以及与这些相关因素相互作用的过程中发挥作用。细胞极性是一个十分保守的过程,它在细胞分化、细胞迁移以及胚胎发育的过程中都起着十分重要的作用。FLYWCH转录因子是一类具有锌指结构域的转录因子,锌指结构域在DNA和RNA的结合以及蛋白之间的相互作用和膜之间的相互作用中都发挥着重要的作用,有报道指出FLYWCH转录因子包括FLH-1,FLH-2和FLH-3,它们作用于胚胎发育时期会抑制lin-4和其它在胚后期会上调miRNAs的转录。本文重点研究了dyn-1和flh-1这两个基因的功能。NFκB是一个由复杂的多肽亚单位组成的蛋白家族,它作为信号传导途径中的枢纽,参与炎症、免疫、肿瘤的发生和发展、细胞凋亡的调节以及胚胎的发育等多种生理、病理过程的基因调控,是一种关键性的核转录因子。转录因子NFkB家族是由NFkB1、NFkd32、RelA和c-Rel构成。抑制因子IKB的降解将会激活该途径。本文选取了C.elegans中核转录因子nfkb及其rela亚基和抑制物ikb-1基因,通过分子克隆、蛋白表达、RNAi、免疫荧光定位、Westernblot以及RT-PCR等方法研究了IKB-1与NFκB以及RelA的相互作用和关系,并通过ClustalX和Bioedit软件分析了这几种线虫中的蛋白与人和小鼠同源蛋白序列的相似性情况。 本文首先用RNAi的方法研究了这几种基因沉默后对线虫虫株N2、daf-2(e1370)和daf-16(e1038)寿命的影响,结果发现ikb-1 RNAi后对寿命无显著影响,dyn-1 RNAi后会照成严重的寿命缩短以及胚胎致死和不孕;flh-1和nfkb以及rela都会照成三种虫株寿命缩短。 免疫荧光定位发现这五种蛋白在线虫体内都有广泛分布,在胚胎时期,DYN-1以及FLH-1都集中分布在细胞质中,而三种核转录因子蛋白NFκB,RelA,IKB则分布在细胞核当中。 为了进一步研究这五种基因对寿命的影响原因,RT-PCR以及Western blot的方法检测了dyn-1、flh-1、ikb-1、nfkb和rela在N2、daf-2(e1370)和daf-16(e1038)虫株中的表达情况以及DAF-2和DAF-16在干扰虫体内的表达情况。结果发现DYN-1参与了线虫的寿命调节,Western blot以及RT-PCR的实验结果发现DYN-1与DAF-16有相互作用,RT-PCR的实验结果表明在daf-16(e1038)中dyn-1的表达上升,说明DAF-16对DYN-1的表达有抑制作用;FLH-1的表达改变虽然会缩短线虫寿命,Western blot和RT-PCR的实验结果表明FLH-1在daf-2(e1370)和daf-16(e1038)虫株中的表达量与N2中无明显变化。IKB-1不参与线虫的寿命调节,但RT-PCR的结果表明在daf-2以及daf-16中IKB-1的表达量有所下降,说明DAF-2和DAF-16都是IKB-1表达所必须的;NFrd3、RelA虽与哺乳动物中的同源蛋白相似性较低,但是二者在线虫中的表型类似,RT-PCR检测到在daf-2(e1370)中二者表达量均下降,说明daf-2是NFrd3和RelA表达所必须的,二者的缺失均会导致线虫寿命的缩短。 在蛋白相互作用的研究上,发现IKB-1对NFkB和RelA的表达有抑制作用,而NFkB和RelA的表达与否并不影响IKB-1的表达。