木瓜属种质资源的SRAP分子标记与评价

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木瓜属(Chaenomeles)起源于我国,既是著名的观赏花木又是传统的中药材,在园林绿化和中药材、食品及化妆品生产中具有广泛的应用。木瓜属植物在我国约有三千多年的栽培历史。由于本属植物种间杂交容易,表型可塑性强,因此品种和类型十分丰富,这为园林应用提供了丰富的素材,但也造成了种质资源鉴别和品种分类的困难。本文在广泛收集全国木瓜属种质资源的基础上,利用SRAP分子标记技术对98份木瓜属种质进行了研究,对供试材料进行聚类分析,编制了木瓜属的分子检索表并进行了核心种质的初步构建,为品种分类及鉴定、杂交育种的亲本选择和种质资源保护等研究奠定了基础。主要研究结果如下:1.运用二次正交旋转组合设计得到木瓜属SRAP-PCR反应的最优体系,即Mg2+1.5mmol L-1、dNTPs0.4mmol L-1、引物0.379μmol L-1、Taq DNA聚合酶2U、模板DNA67.15ng,总体积为25μl。各因素对PCR反应的影响大小依次为:Taq DNA聚合酶>Mg2+> dNTPs>模板DNA>引物。2.以SAS软件为基础,对PCR反应的5个因素进行了单因子效应分析和双因子交互效应分析,初步阐明了各因素之间的相互作用关系并总结出一定的规律,为PCR反应的优化提供借鉴。3.从157对SRAP引物中筛选出能稳定扩增的引物32对,并利用其中较优的17对引物对所有供试材料进行了扩增,共检测到525个多态性位点,多态位点百分数为100%,平均每对引物扩增出30.9个多态性位点;有效等位位点数(Ne)在1.04711.2274之间,平均值为1.1289;Nei’s遗传多样性指数(H)在0.04280.1652之间,均值为0.1007;Shannon信息指数(I)在0.09860.2863之间,均值为0.1911。4.98份供试材料之间的Nei遗传相似系数范围是00.6596,平均值为0.2192,表明各材料间亲缘关系较远。采用UPGMA聚类法可将98份材料分为9类,其中种源为一级分类标准,杂交品种依据其杂交亲本的来源首先聚类;花色、花型、瓣型及种源地作为二级分类标准互相影响小类群的划分。对9个类的遗传多样性分析显示,木瓜属植物类间变异在总的遗传变异中平均占23.2%,各类间的遗传距离均不大且基因流动性较高(Nm=1.6580),这也验证了木瓜属植物种间杂交容易、杂交品种较多的现状。5.筛选出了6对核心引物用于构建木瓜属指纹图谱,其中引物ME3-EM3与另外5对引物中任意一对两两组合均可以鉴别出所有品种。结合引物ME3-EM3和ME6-EM1扩增出的19条多态性条带,借鉴常规植物检索表编制方法,编制了98个品种的分子标记检索表。6.以SRAP标记为基础,构建木瓜属种质资源的核心种质。按照10%80%的整体取样比例,依据分组法和不分组法分别取样,对比两方法的异同。另外,结合C语言编程,提出了适用于本属植物核心种质构建的方法:多态位点数最高法。与目前常用的核心种质构建方法相比,该方法简单高效,采用较低的取样比例(20%)即可达到核心种质的构建标准。7.利用改良的CTAB法成功提取出木瓜(C. sinensis)基因组DNA。
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