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第一部分HCV感染者血浆雌二醇、白细胞介素-12水平及其相关性的研究【背景】20世纪80年代末至90年代初,江苏某地区出现非法的、不规范的商业性血液采集,造成了丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)等经血传播的病毒在该人群中的感染和扩散。HCV感染所致的丙型病毒性肝炎易发展至慢性肝炎、肝硬化,甚至还可能进展为肝细胞癌,严重影响该人群的生活质量。本研究分析有偿献血人群丙型病毒肝炎感染者中血浆雌二醇(Estradiol,E2)、白细胞介素-12(interleukin 12,IL-12)水平及其相关性。【方法】根据江苏省某地区有既往有偿献血史的199例人群的抗-HCV抗体和HCV RNA检测结果,将调查对象分为健康对照组72例、自限清除组39例、持续感染组88例,分别检测其血浆中E2、IL-12的浓度以及各项肝功能指标。【结果】献血史、献血次数和肝功能指标在三组调查人群间的分布差异均存在统计学意义(P值均<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,献全血史(OR=2.83,95%CI=1.05-7.70)、单采血浆史(OR=5.57,95%CI=2.26-13.75)是HCV感染的独立危险因素。HCV感染者中血浆E2和IL-12水平存在正相关关系(r=0.654,P<0.001)。【结论】有偿献血是丙型肝炎传播的一个重要危险因素;雌二醇可能正向调节IL-12的表达,进而影响丙型肝炎的感染与转归,这仍需进一步进行功能研究与验证。第二部分雌激素受体2基因多态性与高危人群HCV感染转归的关联研究【背景】丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染所引起的丙型肝炎在男性和女性中呈现出不同的临床表现和生物学特征,这提示着雌激素可能参与其感染转归的过程。雌激素效应的发挥主要通过与雌激素受体(estrogen receptor,ER)结合,因此雌激素受体基因多态性可能影响丙型肝炎的发病进程。目前关于雌激素受体2基因(estrogen receptor gene 2,ESR2)多态性与丙型肝炎感染转归的关系并不十分明确。【方法】本研究采用病例对照研究,其中病例组包括813例HCV持续感染者和479例HCV自限清除者,对照为1174例健康者。在获得其知情同意后对所有的调查者进行问卷调查,收集相关流行病学资料,同时采集静脉血用于雌激素受体2基因分型检测。基因分型基于Taq Man分型技术,在ABI7900实时PCR仪上进行。应用多因素Logistic回归模型分析ESR2上三个潜在的功能位点(rs1256049,rs4986938,rs944459)的单核苷酸多态性与丙型肝炎感染转归的关系,计算优势比及其95%可信区间。构建野生型及突变型的ESR2-rs4986938报告基因质粒,将其转染至HEK293细胞和He La细胞,计算不同基因型质粒的相对荧光素酶活性。【结果】在调整年龄、性别、感染途径和/或HCV基因分型后,多因素Logistic回归分析显示,在男性中rs4986938位点的A等位基因增加了丙型肝炎的感染风险(相加模型:调整OR=1.493,95%CI=1.102-2.022,P=0.010)。而在女性亚组中,该等位基因可以降低病毒感染的风险(GA vs.GG:调整OR=0.710,95%CI=0.544-0.928,P=0.012;显性模型:调整OR=0.686,95%CI=0.530-0.889,P=0.004;相加模型:调整OR=0.703,95%CI=0.560-0.883,P=0.002)。同时,rs4986938位点的突变纯合子AA基因型可促进HCV的自限清除(调整OR=0.237,95%CI=0.078-0.716,P=0.011)。相加模型结果表明每个增加的突变等位基因约降低34%的丙型肝炎慢性化的风险(调整OR=0.659,95%CI=0.489-0.889,P=0.006)。此外,rs4986938与rs1256049位点之间存在交互作用,并可降低HCV的感染风险(OR=0.583,95%CI=0.436-0.780,P=3.000×10-4)。在纳入年龄、性别、HCV基因型构成模型的工作特征曲线下面积显示其对HCV病毒清除能力的预测无统计学意义(95%CI=0.496-0.560,P=0.092)。当在上述变量中增加三个位点的遗传信息后,其曲线下面积增加至0.550(95%CI=0.518-0.582,P=0.003)。构建ESR2基因3ˊ-非编码区(3ˊ-untranslated region,3ˊ-UTR)不同基因型的质粒,将其瞬时转染至HEK293细胞及He La细胞后的报告基因检测结果显示,rs4986938突变基因型的质粒荧光素酶相对活性均显著高于野生型(P值均<0.001)。【结论】本研究首次发现雌激素受体2基因的多态性(rs4986938)可能与中国汉族人群HCV感染转归有关,并且该作用在存在性别差异,这提示雌激素受体2可能是影响丙型肝炎病毒感染及清除的候选基因。