论文部分内容阅读
目的:最近的研究显示,人类染色体17p13.3与多种肿瘤,包括白血病/淋巴瘤的发病有关。HC(hepatic related gene)系列基因包括HC56、HC71和HC90等,系上海市肿瘤研究所癌基因和相关基因国家重点实验室,应用定位克隆技术,从人类染色体17p13.3克隆的新的疾病相关基因。本研究主要应用体外基因转染的方法,观察HC56、HC71和HC90基因过表达时,对白血病/淋巴瘤细胞株生长的作用;并重点研究外源HC56基因对白血病/淋巴瘤细胞株细胞增殖、凋亡的作用,以及对白血病/淋巴瘤细胞化疗药物敏感性的影响。以了解HC基因系列,尤其是HC56基因的生物学功能,同时为白血病/淋巴瘤的基因治疗提供实验依据。方法:①应用脂质体介导的基因转染方法,将外源基因HC56、HC71和HC90分别导入T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞、B细胞淋巴瘤/白血病细胞株Raji细胞和髓系白血病细胞株K562细胞,用苔盼兰拒染试验,观察基因的瞬时表达对细胞活力的作用。②把HC56基因导入Jurkat和Raji细胞,经G418筛选,获得稳定表达外源HC56基因的细胞克隆后,用台盼蓝拒染试验计数活细胞数、绘制生长曲线的方法,和软琼脂集落培养的方法,观察HC56基因产物对Jurkat和Raji细胞增殖的影响;③把HC56基因转染B淋巴瘤raji细胞后,应用流式细胞术、原位末端标记法(TUNEL)以及Hochest33258荧光染色检测,观察HC56基因产物对细胞凋亡的作用;④把HC56基因转染Jurkat细胞,经G418筛选,获得稳定表达外源HC56基因的细胞克隆后,应用MTT法,观察HC56基因产物对Jurkat细胞拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙(VP16)敏感性的影响。结果:①Jurkat、Raji和K562细胞瞬时转染HC56基因后,第24、48、72和96小时 HC56基因对淋巴瘤/白血病细胞增殖和凋亡作用的研究 分别计数活细胞,发现与转染PBK/CMV空载体的实验对照组比较,细胞的活力明 显受抑制(P<0.01);Jurkat细胞瞬时转染llC71基因后,第 24、48、72和 96小 时分别计数活细胞,发现与转染叫K/CMV空载体的实验对照组比较,细胞的活力 也明显受抑制(P<0.01);Jurkat细胞瞬时转染HC90基因后,仅在第96小时计 数时,发现细胞的活力受抑制(P<0.05),在第 24、48和 72小时计数时,未发现 细胞的活力受抑制午川.05入②外源 HC56基因在Jurkat和 Ran细胞的稳定表达, 可抑制细胞的增殖,使细胞的增殖速度明显减‘慢,倍增时间延长O<0刀1),细胞 集落形成数明显减少o<0.of);③外源 HC56基因转染 Jrfkat和 Ran细胞后, 流式细胞术检测显示,亚二倍体细胞百分率增加,TUNEL和 Hochest 33258荧光 染色检测到细胞凋亡形态学特征;④HC56基因转染 Jurkat细胞,在 ill g/il、 10 u g/mlj0 u g/ml浓度的 VP16作用下,细胞的存活率分别为 41.5士3.8%二8.7 士 3.7%、7.h 0.6%,明显低于在相应的 VP浓度作用下的 PBK/CMV空载体 转染的对照细胞(分别为77.8士6*%,*.1土4.5%,32.8士2.*)(<0*1)。结 论:①HC71基因的瞬时表达可明显抑制Jurkat细胞的活力;②HC90的瞬时表 达对Jurkat细胞的活力有轻度抑制;③HC56基因的瞬时表达可明显抑制Jurkat、 R4i和 K562细胞的活力;④HC56基因在儿*at细胞和 Ran细胞的稳定表达可 抑制细胞的增殖;⑤转染外源HC56基因可诱导Jurkat和* 细胞的凋亡;③ IIC56基因可增加儿rk。细胞对化疗药物足叶乙成(*P16)的敏感性。综合以上 的结论,我们认为IIC56基因可能为一新的侯补抑瘤基因,其基因产物对白血病 /淋巴瘤细胞的恶性表型有抑制作用。