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本研究选取初生未哺乳的0日龄仔猪、哺乳前期的5日龄仔猪、哺乳中期的15日龄仔猪和生长期的100日龄猪为研究对象,采用免疫组织化学、血液生化分析等方法探讨小肠5-HT和5-HT2BR的分布规律以及5-HT在外周血中的合成和代谢规律。此外,本研究还以体外培养的大鼠肠黏膜MVECs为模型对5-HT2BR在肠道微循环的调节作用进行了初步研究。主要研究结果如下:
1.猪小肠5-HT和5-HT2BR的分布猪小肠5-HT在0、5、15和100日龄的十二指肠、空肠和回肠中均有分布。5-HT免疫反应阳性细胞分布于小肠黏膜中下部的绒毛和肠腺中。5-HT免疫反应阳性细胞多呈锥体形,免疫反应阳性产物呈棕黄色颗粒状,位于胞质中,胞核阴性。
猪小肠5-HT免疫反应阳性细胞密度、绒毛和肠腺5-HT免疫反应阳性细胞数量均受日龄和肠段共同影响。由0日龄至100日龄猪小肠5-HT免疫反应阳性细胞密度呈先升高后递减的趋势,绒毛5-HT免疫反应阳性细胞数量呈递减趋势,肠腺5-HT免疫反应阳性细胞数量呈增加趋势;小肠各段5-HT免疫反应阳性细胞密度呈现由前到后显著递减的趋势,绒毛5-HT免疫反应阳性细胞数量呈现由前到后先递增后递减的趋势,肠腺5-HT免疫反应阳性细胞数量呈现由前到后先递减后递增的趋势。
0日龄和5日龄仔猪小肠没有5-HT2BR分布,15日龄仔猪仅有4头在十二指肠中分布有5-HT2BR,100日龄时,5-HT2BR免疫反应阳性细胞广泛分布于十二指肠、空肠和回肠。5-HT2BR免疫反应阳性细胞多分布于小肠黏膜固有层结缔组织中,且位于肠腺周围。5-HT2BR免疫反应阳性细胞体积较小,多呈圆形、卵圆形,免疫反应阳性产物呈棕黄色颗粒状,位于胞质中,胞核阴性。5-HT2BR也分布于部分肌间神经元的胞体中。
在有5-HT2BR表达的肠段中,100日龄十二指肠黏膜5-HT2BR免疫反应阳性细胞的密度显著高于15日龄十二指肠(P<0.05);100日龄十二指肠黏膜5-HT2BR免疫反应阳性细胞密度显著高于其他两个肠段(P<0.05),且回肠黏膜5-HT2BR免疫反应阳性细胞密度显著高于空肠(P<0.05)。
2.大鼠小肠5.HT和5.HT2BR的分布大鼠5-HT在十二指肠、空肠和回肠中均有分布。5-HT免疫反应阳性细胞分布于小肠黏膜中下部的绒毛和肠腺中。5-HT免疫反应阳性细胞多呈锥体形,免疫反应阳性产物呈棕黄色颗粒状,位于胞质中,胞核阴性。
大鼠小肠5-HT免疫反应阳性细胞密度除空肠具有性别差异(P<0.05)之外,其余均无显著性差异(P>0.05)。绒毛5-HT免疫反应阳性细胞数量十二指肠显著高于空肠和回肠(P<0.05),空肠和回肠之间无明显差异(P>0.05)。肠腺5-HT免疫反应阳性细胞数量空肠显著高于十二指肠和回肠(P<0.05),且十二指肠肠腺5-HT免疫反应阳性细胞数量显著高于回肠(P<0.05)。大鼠小肠5-HT2BR广泛分布于十二指肠、空肠和回肠。5-HT2BR免疫反应阳性细胞多分布于小肠绒毛中轴的固有层结缔组织中,5-HT2BR免疫反应阳性细胞体积较小,多呈圆形、卵圆形,免疫反应阳性产物呈棕黄色颗粒状,位于胞质中,胞核阴性。5-HT2BR也分布于部分肌间神经元的胞体中。
大鼠小肠黏膜5-HT2BR免疫反应阳性细胞密度受性别和肠段的共同影响。雌性大鼠小肠黏膜5-HT2BR免疫反应阳性细胞密度显著高于雄性(P>0.05)。小肠黏膜5-HT2BR免疫反应阳性细胞密度由前到后呈递减趋势。
3.外周血中5-HT的合成与代谢由0日龄至15日龄,仔猪外周血中L-Trp的含量显著增加(P<0.05),5-HT的含量在0日龄时显著高于5日龄和15日龄(P<0.05)。0日龄时,L-Trp-5HT通路转化率明显高于5日龄和15日龄(P<0.05)。5-HIAA在各日龄仔猪外周血中没有检出。
成年SD大鼠外周血中的L-Trp、5-HT以及转化率均无性别差异。血液中5-HT的平均含量10.82μmol/L(即2.30μg/mL)即作为体外细胞试验的参考条件。5-HIAA在大鼠外周血中没有检出。
4.5-HT对大鼠肠黏膜MVECs的作用机理大鼠肠黏膜MVECs无内源性5-HT,在细胞膜上有5-HT2BR分布。
在大鼠肠黏膜MVECs培养液中加入2.30μg/mL的5-HT培养6小时之后可以显著降低FN的分泌量(P<0.05),而培养12小时之后0.23μg/mL和23.0μg/mL的5-HT均可以显著降低FN的分泌量(P<0.05)。5-HT2BR激动剂BW-723C86和拮抗剂SB200646均可降低大鼠肠黏膜MVECs FN的分泌量(P<0.05),随后加入的各浓度的5-HT都会使FN的分泌量进一步降低(P<0.05)。
本研究中各浓度5-HT对大鼠肠黏膜MVECs NO的分泌均没有影响(P>0.05),试验中未检测的MVECs分泌ET-1。