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研究目的: 绒癌是发生于生育年龄妇女的高度恶性肿瘤,对化疗敏感,是人类最早可以治愈的实体瘤之一。但仍有20%的患者因治疗失败而死亡,化疗是绒癌的主要治疗方法,对化疗药物耐受性的产生是治疗失败的主要原因。肿瘤的耐药可以是先天性的,也可在接受化疗后获得,涉及多种耐药基因的表达,因此逆转肿瘤业已形成的多药耐药性,是进一步提高绒癌疗效的有效途径。本研究拟应用基因工程技术将细胞因子基因(IL-2)导入已建立的绒癌耐药细胞株,观察细胞因子基因转导对绒癌细胞耐药性的逆转作用。 研究内容: 一 建立绒癌耐药细胞株 采用浓度梯度递增法和间歇诱导的方法,用5-Fu,MTX,VP-16诱导绒癌细胞株JEG-3建立6个耐药细胞株,JEG-3/Fu1,JEG-3/Fu2,JEG-3/MTX1,JEG-3/MTX2,JEG-3/VP1和JEG-3/VP2,采用MTT法测定耐药细胞株对5-Fu,MTX,KSM,VP-16和Taxol的耐药指数,用RT-PCR测定亲本细胞及各耐药细胞株耐药相关基因(LRP,MRP,GST-π,DHFR,MDR-1)的表达,比较各种细胞生长曲线,群体细胞的倍增时间,分泌β-HCG的差异,以了解获得性耐药的机理。 结果:用RT-PCR扩增结果表明JEG-3细胞株在诱导耐药前即有LRP,MRP,GST-π,DHFR的共表达,而无MDR-1的表达。用VP-16,5-Fu采用间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞株MDR-1表达增强,其它耐药基因的表达无改变。用MTX诱导的耐药细胞株及用VP-16,5-Fu持续诱导形成的耐药细胞株