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目的:探讨不同浓度大豆异黄酮对体外培养软骨细胞的影响,进一步揭示大豆异黄酮在骨性关节炎关节软骨退变中的作用。方法:1、取3周龄、雌性幼兔三只,无菌条件下切取股骨头、股骨髁部关节软骨,分离软骨细胞进行培养传代,将第一代软骨细胞随机分成阳性对照组(17β-E2组,E2组)、阴性对照组(溶媒对照组)、10-5mol/L~10-10mol/L SI组,共8组,分别以每孔2×103个软骨细胞接种于96孔板,每组平行4孔;以每孔1×104个软骨细胞接种于24孔,每组平行3孔,每孔底部预先放入无菌5mm×5mm盖玻片。48h细胞贴壁后予以不同浓度药物干预,隔天换药一次,每天取一块96孔板进行MTT测定,连续测定8天;药物干预一周后取出24孔板内盖玻片分别行雌激素β受体免疫组织化学染色、甲苯胺蓝染色和瑞氏染色。2、取第一代软骨细胞随机分成A、B两组,B组先用IL-β1干预,每组又分成E2组、溶媒对照组、10-5mol/L~1010mol/L SI组,共8个亚组,以每孔2×105个细胞接种于6孔培养板中,每亚组平行2孔,48h后,A组予以不同浓度药物干预5天,B组先以10ng/ml IL-β1干预24h后予以不同浓度药物干预5天,隔天换药一次。提取培养软骨细胞总RNA,RT-PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、biglycan、TGF-β1、IGF-1 mRNA表达情况。结果:1、MTT结果显示:各组24小时内作用无明显差异(p>0.05);10-5mol/L SI组从24小时后测得的OD值与溶媒对照组和E2组的OD值有显著性差别(p<0.05)。10-6mol/L、1010mol/L SI组的OD值与与溶媒对照组的OD值无明显差别,从24小时后测得的OD值与17β-E2组的OD值有显著性差别(p<0.05)。10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L SI组从48小时后测得的OD值与溶媒对照组的OD值有显著性差别(p<0.05)。雌激素β受体免疫组化显示未滴加一抗的爬片无棕黄色颗粒,其余各组均有雌激素β受体表达,阳性在体外培养的软骨细胞中有棕黄色深染颗粒存在于细胞浆和(或)细胞核内。甲苯胺蓝染色显示胞浆中有不同程度的紫红色颗粒,体外培养的软骨细胞中蛋白多糖存在。2、SI对软骨细胞mRNA表达的影响:正常关节软骨细胞均有biglyoan、Ⅱ型胶原、TGF-β1mRNA表达,10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L SI能刺激正常关节软骨细胞mRNA表达,而10-5mol/L SI则起抑制作用;IL—1β抑制软骨细胞biglycan、Ⅱ型胶原、TGF-β1 mRNA的表达,10-5mol/L SI能协同IL—1β起抑制作用,10-7mol/L、10-8mol/L SI能部分对抗IL—1β的抑制作用。10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L SI能刺激正常关节软骨细胞表达Ⅰ型胶原mRNA表达,变性老化的软骨细胞都有Ⅰ型胶原mRNA表达,其中10-8mol/L、10-9mol/L SI能部分对抗IL-1β的作用。10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L SI能诱导关节软骨细胞表达IGF-1 mRNA。10-7mol/L、10-8mol/L SI能诱导变性关节软骨细胞表达IGF-1 mRNA。结论:1、不同浓度SI对软骨细胞增殖的作用表现出双重作用,10-5mol/L的SI抑制软骨细胞的增殖;而10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L的SI促进软骨细胞的增殖,且随着浓度的增加作用增加。2、不同浓度SI对软骨细胞胶原、蛋白多糖、IGF-1、TGF-β1 mRNA表达的作用不同。3、体外关节软骨细胞存在雌激素受体,SI对软骨细胞的作用与雌激素有相似性,提示SI可能通过雌激素受体发挥作用。4、SI可促进软骨细胞的增殖,对胶原、蛋白多糖等的作用强于雌激素,为将SI用于OA的临床防治提供了一定的药理和药效学依据。5、SI和雌激素不同作用提示:(1)SI作用于雌激素α、β受体的比率可能与雌激素不同;(2)SI对软骨细胞的作用有与雌激素不同的作用途径。