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近些年，全球石油价格一再上涨，石油资源紧缺状况日益凸显，国际消息称，全球石油储量只够用40年，因此，可再生能源资源的开发与利用成为必然。生物柴油是以动植物油脂为原料与甲醇（乙醇）经过酯交换反应制得的长链脂肪酸酯，安全无毒、燃烧性好、可再生，可以作为石化燃料的替代品。在适宜条件下，某些微生物可在体内积累单细胞油脂，例如细菌、酵母和藻类等，尤其是产油脂酵母生长速率快，油脂含量高，具有广泛的应用前景。从实验室已有的7株圆红冬孢酵母（R. toruloides）中筛选得到一株油脂含量较高的菌株21167。采用单因子实验对该菌株产油脂培养基及发酵条件进行优化，得到最佳培养基配方为（w/v）：8.0%葡萄糖，522碳氮比（0.04%酵母粉），0.1%KH2PO4，0.15%MgSO4·7H2O，0.02%（NH4）2SO4，0.005%CaCl2，0.001%FeCl3·6H2O，0.002%ZnSO4·7H2O，0.0002%MnSO4·H2O，培养基初始pH值为4.0。按10%（v/v）（OD600nm=30）的接种量，在28℃和180rpm下振荡培养120h。为降低生产成本，利用产淀粉酶扣囊复膜酵母（Saccharomycopsis fibuligera）IFO菌株水解木薯淀粉，以木薯淀粉水解液作为碳源进行分批发酵，菌体生物量达到22.0g/L，油脂含量达到63.4%（w/w）。对21167菌株产生的油脂进行脂肪酸成分分析，C16:0和C18:1总含量达到83.8%，说明该菌株产生的油脂主要成分为长链脂肪酸，可以作为合成生物柴油的原料。实验室获得了一株能产生高活力淀粉酶的扣囊复膜酵母（S. fibuligera）突变菌株A11-c，具有同时水解α-1,4和α-1,6-糖苷键的能力，非常适合水解木薯淀粉（木薯淀粉由直链淀粉和支链淀粉组成）。为了实现木薯淀粉边水解边利用生产油脂，采用细胞固定化技术，将菌株A11-c细胞进行固定，并与游离的圆红冬孢酵母细胞混合培养。A11-c细胞将木薯淀粉水解转化为单糖，供圆红冬孢酵母细胞生产油脂。经正交实验分析，获得A11-c细胞最佳固定化条件（w/v）：6.0%聚乙烯醇，2.5%海藻酸钠，3.0%氯化钙，pH值为8.0，4℃固定8h。固定化细胞最高淀粉酶活力可以达到325.3U/mL。经发酵罐120h联合培养之后，圆红冬孢酵母菌体生物量达到20.1g/L，油脂含量达到54.9%（w/w）。将上述实验获得的油脂与甲醇在NaOH催化剂作用下进行酯交换反应制备生物柴油。反应的工艺参数为：催化剂用量为油脂质量的1.0%，醇油摩尔比为6:1，在65℃下搅拌，反应1.0h，经三次酯交换反应，得到可以在空气中充分燃烧的生物柴油。