论文部分内容阅读
研究目的评价DC-CTL治疗原发性肝癌体系的质量控制,分析DC-CTL免疫治疗后对原发性肝癌患者引起的免疫应答、不良反应和临床指标的变化,探讨DC-CTL免疫治疗后患者生活质量状况,为DC-CTL治疗原发性肝癌体系的初步建立及其疗效和安全性进行评估。研究方法应用本实验室自建的DC-CTL治疗体系,进行下列研究：1、选取在我院生物治疗科2012年2月至2013年4月期间接受DC-CTL细胞治疗的原发性肝癌病人(含肝细胞癌及肝内胆管癌)全血样品进行研究。2、采用机器采血法采集患者外周血单个核细胞(PBMC),用CD14磁珠分选CD14+细胞,分离后在体外加入细胞因子培养、扩增DC细胞,用重组非增殖型腺病毒携带的肿瘤相关抗原(p53、hTERT、Survivin)感染DC细胞,进行多抗原负载,诱导DC成熟,并用流式细胞仪检测DC细胞表面标记。3、用CD3磁珠分选CD3+细胞,冻存至第8天与成熟的DC细胞共培养,诱导抗原特异性CTL,加入细胞因子扩增CTL,第14天采用流式细胞仪检测CD69、IFN-γ、 TNF-a和IL-4水平。细胞在回输前,进行细菌、真菌支原体和内毒素检测。4、采用流式细胞仪检测DC-CTL治疗前后患者的全血样品各项免疫指标变化,包括：CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+和Treg。5、检测患者DC-CTL治疗前后血常规、肝肾功能、以及血清肿瘤指标变化,包括：白细胞(WBC)计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、TBIL、DBIL、Alb、ALT、 AST, GGT、AKP、AFP、CEA、CA199和CA125。6、观察患者接受DC-CTL治疗后的不良反应,采用EORTC QLQ-C30评估患者生活质量状况,采用Kaplan-Meier生存分析比较不同治疗疗程和肿瘤分期的患者间总生存时间(Overall Survival)的变化。研究结果1、DC细胞在第8天时成熟能力较好,流式细胞仪检测DC表面标记阳性率均达到85%以上,CD80+细胞百分比为88.55±4.07,CD86+细胞百分比为91.16±7.32,CD11c+细胞百分比为95.24±4.97,CD83+细胞百分比为87.4±5.08。2、DC细胞抗原递呈和激活T细胞免疫应答的能力较好。第14天时,流式细胞仪检测CD69+的T细胞比例达到了90%以上。细胞因子检测结果显示,与Ad-Blank组相比,实验组的IFN-y和TNF-a的水平有明显的上升,达到了17%和19.3%,而IL-4的比例两者均低于1%。3、细胞回输前细菌、真菌支原体和内毒素检测结果显示,回输细胞的内毒素和真菌葡聚糖水平均控制在标准范围以内。4、DC-CTL治疗原发性肝癌体系可以显著降低体内Treg细胞的水平。在进行DC-CTL治疗前,患者的各项免疫指标与健康人具有一定差异性,其中Treg细胞比例显著升高,经过治疗后,CD3+CD8+细胞比例有一定的上升,而Treg细胞比例显著下降(p<0.05)5、DC-CTL治疗原发性肝癌体系产生了一定的临床响应。WBC、LY、Alb、GGT、 AKP五项指标在统计学上有显著性差异,HCC组患者的淋巴细胞计数在治疗前低于参考值,治疗后有了显著的上升,且GGT和AKP水平在治疗后有了明显的下降(p=0.011,p=0.037); ICC组患者TBIL水平在治疗后有了显著性的下降(p=0.046)。6、DC-CTL治疗原发性肝癌体系对患者的副作用小,具有一定安全性。所有患者均没有明显的或特殊的不良反应,多为细胞回输后的发热,所有患者均未出现过敏等情况。7、DC-CTL治疗原发性肝癌体系对患者的生活质量有一定的改善。HCC组患者中有5例QoL得分在治疗后升高,4名患者生活质量未发生明显改变,从总体来看,躯体功能得分上升,并有7名患者在气促方面有了明显改善。ICC组患者中有2例患者疼痛减轻,3名患者失眠有了显著改善。8、DC-CTL治疗原发性肝癌体系对连续接受治疗或TNM分期早期的患者具有更好的疗效。HCC组患者中位生存期为15个月,ICC组患者中位生存期为11个月。其中有6例生存时间超过12个月,3例HCC患者生存时间超过24个月。Kaplan-Meier生存分析显示连续接受3次以上DC-CTL治疗患者的生存时间显著长于只接受了3次以内治疗的患者(p<0.001),且区域淋巴结或远端无转移患者的生存时间长于转移的患者(p=0.034,p=0.011)结论DC-CTL治疗原发性肝癌体系有严格的质量控制,可以显著降低体内Treg细胞的水平、改善患者免疫功能状态,提高生活质量,且对患者的副作用小,具有一定安全性。