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黄曲霉毒素和赭曲霉毒素因在食品中分布面广、检出率高且毒性强而引起关注。针对黄曲霉毒素和赭曲霉毒素的检测方法中应用较广的是ELISA、HPLC及HPLC-MS法,但是由于食品基质复杂多样且霉菌毒素含量低,因此需要合适的前处理手段从样品中富集、分离霉菌毒素(如固相萃取技术)。然而,目前的固相萃取材料受到了吸附选择性和吸附容量的限制,而目前应用最多的免疫亲和柱的价格昂贵、不易生产修饰且容易失活,因此新型的霉菌毒素吸附材料的研发成为研究热点。近年来研究发现核酸适配体(Aptamer)能与特定的靶物质具有特异性亲和结合作用,本文依据筛选出的核酸适配体能分别与赭曲霉毒素A(OTA)和黄曲霉毒素M1(AFM1)相互作用,以其作为功能单体进行修饰制备了2种新型的核酸适配体功能材料,分别研究了它们对OTA和AFM1的吸附性能以及富集分离条件,并应用于乳制品中霉菌毒素的检测,其具体研究内容和结果如下:1、采用纳米金(GNPs)比色法研究了核酸适配体与GNPs显色测定条件,加入OTA和AFM1通过650 nm和530 nm的A650/A530的信号变化分别表征了核酸适配体分别与OTA、AFM1之间的相互作用。结果表明,核酸适配体能够使GNPs体系达到一个相对稳定状态,且能拮抗盐对GNPs体系的诱导聚沉作用,当二者处于拮抗平衡临界状态时加入OTA、AFM1,发现两种核酸适配体能分别与OTA、AFM1形成复合物,导致GNPs体系颜色由红色转变为蓝色,表明了它们之间具有较强的特异性结合亲和作用,筛选出的两种核酸适配体(Aptamer-1和Aptamer-2)可作为功能单体制备特异性亲和材料。2、以链霉亲和素磁珠为载体材料,用OTA的核酸适配体(Aptamer-1)作为功能单体,通过链霉亲和素和生物素的生物学识别结合作用制备Aptamer-1功能化磁珠,并研究了其修饰条件和吸附性能。采用UPLC-Q-Orbitrap MS/MS分析磁珠上Aptamer-1的修饰量,优化了修饰条件:Aptamer-1浓度为0.5μmol/L、20 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液(pH7.2)下修饰4 h。通过UPLC建立OTA的分析方法,优化了Aptamer-1功能化磁珠对OTA富集分离条件:吸附时间为120min、体系中Mg2+浓度为10 mmol/L、K+浓度为5 mmol/L、温度为50℃,10%乙腈-水(v/v)为洗脱溶剂、超声洗脱10 min。吸附选择性实验、等温吸附实验、稳定性实验结果表明:Aptamer-1功能化磁珠仅对OTA有高度特异性亲和作用,吸附容量为38.67μg/g,材料具较高的批次稳定性(RSD不大于1.4%)和时间稳定性(40天内稳定)。3、以羧基微球为载体材料,用AFM1的核酸适配体(Aptamer-2)作为功能单体,通过EDC/NHs介导的酰胺化反应合成Aptamer-2功能化微球,并表征了其修饰和研究了吸附性能。采用UPLC-Q-Orbitrap MS/MS表征磁珠上Aptamer-2的修饰,结果表明Aptamer-2能完全修饰于羧基微球表面。建立UPLC-MS/MS分析AFM1的方法,优化了Aptamer-2功能化微球对AFM1富集分离条件:不需要缓冲溶液体系、溶液pH7、体系中Mg2+浓度为10 mmol/L、洗脱溶剂选择体积分数为75%有机溶剂(甲醇或乙腈)。吸附选择性实验、等温吸附实验、稳定性实验结果表明:Aptamer-2功能化微球对AFM1及其结构类似物有较好的吸附选择性,具有高吸附容量(233.1μg/g)、高批次稳定性(RSD不大于1.7%)和较高的时间稳定性(30天内稳定)。4、基于Aptamer-2功能化微球固相萃取乳制品中AFM1及其结构类似物(AFB1、AFB2、AFG1、AFG2)建立了新型检测方法并进行方法学考察,结果为:溶剂标准工作曲线和基质标准工作曲线的线性方程的相关系数(R2)均大于0.9985,具有良好线性相关性;线性方程斜率比在0.93250.9728内,有轻微的基质效应;运用该方法在牛奶和奶粉中检测AFM1时,检测限分别为0.007μg/kg和0.021μg/kg,检测灵敏度高;空白样品和阳性样品加标回收实验结果表明方法准确度高(加标回收率86.72109.9%)、重现性好(RSD 2.68.7%)。应用于八批乳制品中AFM1及其结构类似物检测,AFM1在其中一种牛奶和其中一种奶粉中检出(分别为0.070μg/kg和0.104μg/kg)。方法能选择性吸附乳制品中AFM1及其结构类似物,检测结果准确度高,重复性好。