乳腺癌发病率逐年升高，尽管早期和有效的辅助治疗使其死亡率稍有下降，但远处转移仍然是治疗失败及死亡的主要原因。因而，如何确定复发、转移的高危患者，及时给予恰当的辅助治疗，对提高乳腺癌患者的生存率有重要的意义。由于传统的临床预后指标有其自身的局限性，尚不能完全反映乳腺癌的生物学特性。随着分子生物学技术的发展，为了进一步指导乳腺癌的诊断、治疗和预后的判断，寻找其它有效的分子生物学指标一直以来都是乳腺癌研究的热点。 Bmi-l是多梳基因家族中的成员之一，被认为是一种癌基因，有报道Bmi-l在多种肿瘤中均呈现高表达，在乳腺癌中也有报道呈高表达，且Bmi-l可以诱导人正常乳腺上皮细胞永生化，Bmi-l还与乳腺干细胞的自我更新有着密切联系。最近又有人报道Bmi-l的高表达与乳腺癌中淋巴结转移呈正相关，提示Bmi-l与乳腺癌的发生发展有着重要关系。 目前，Bmi-l与乳腺癌预后关系的研究并不多，且未见任何关于Bmi-l在乳腺癌晚期中是否起作用的报道。因此，本课题中我们分析了乳腺癌中Bmi-l的表达及其临床意义，同时我们在此基础上也初步探讨了Bmi-l在乳腺癌转移中的作用及可能的机制。 目的 分析Bmi-l在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系，探讨Bmi-l在乳腺癌转移中的生物学功能及可能的分子机制。 材料和方法 1、免疫组化：收集中山大学肿瘤医院2001年2月～2001年7月的乳腺癌标本54例。采用免疫组化(LSAB)的方法检测54例乳腺癌组织中Bmi-l的表达，分析Bmi-l在乳腺癌中的表达及其与病理特征的关系，采用Kaplan-Meier法进行生存分析，采用Cox比例风险模型分析影响生存预后的因素。采用SPSS 10.0 forWindows进行数据分析，P<0.05(双侧检验)认为有统计学意义。 2、细胞培养：建立Bmi-l稳定高表达的细胞株76N.tert/Bmi-l和76R-30/Bmi-l和Bmi-l-RNAi稳定起作用的MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi乳腺癌细胞株。 3、RT-PCR和Western blot：在转录和翻译水平检测Bmi-l及其一些侵袭转移相关分子的表达。 4、侵袭浸润实验：比较76N-tert/Bmi-l和76R-30/Bmi-l与其对照组76N-tert/Vector和76R-30/Vector， MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi和MDA-MB-435S/Scr controlRNAi在侵袭浸润功能上的差异。 5、划痕损伤实验：比较76N-tert/Bmi-l和76R-30/Bmi-l与其对照组76N-tert/Vector和76R-30/Vector，MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi和MDA-MB-435S/Scr controlRNAi在动力学功能上的差异。 6、生长曲线绘图：比较MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi和MDA-MB-435S/Scr control RNAi细胞在分裂增殖上的差异。 7、三维培养：比较76N-tert/Bmi-l和76R-30/Bmi-l与其对照组76N-tert/Vector和76R-30/Vector，MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi和MDA-MB-435S/Scr controlRNAi在模拟体内环境下的生长方式和形态的差异。 8、软琼脂集落形成实验：比较76N-tert/Bmi-l和76R-30/Bmi-l与对照组76N-tert/Vector 和 76R-30/Vector ， MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi 和MDA-MB-435S/Scr control RNAi锚定非依赖性生长方式及集落形成能力的差异。 9、动物试验：比较MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi和MDA-MB-435S/Scrcontrol-RNAi在裸鼠体内成瘤性和转移性的差异。结果1．Bmi-l在乳腺癌中高表达且与TNM分期和淋巴结转移呈正相关及Bmi-l与预后的关系54例乳腺癌中24例Bmi-l呈高表达，强阳性率达44.44﹪(24/54)，Bmi-l的高表达与乳腺浸润性导管癌的年龄、ER、PR，c-erbB2，T分期无显著相关性(P>0.05)，但Bmi-l的高表达与乳腺癌的TNM分期、淋巴结转移情况密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier法分析5年生存曲线，得出Bmi-l低表达的乳腺癌患者5年生存率为82.93﹪，而Bmi-l高表达的乳腺癌患者5年生存率仅为37.50﹪，Bmi-l低表达组的总体生存率优于Bmi-l高表达组，统计学上(Log-Rank检验)有显著性的差异(P<0.05)，而且随着Bmi-l表达的增强，总体生存曲线有逐渐下降的趋势。多因素Cox比例风险模型的预后分析中，发现Bmi-l和TNM分期、淋巴结转移均可作为判断乳腺癌患者预后生存的独立因素。Bmi-l表达强度越高，患者预后生存时间越短。 2．Bmi-l外源性高表达及Bmi-l-RNAi沉默的稳定乳腺细胞株的建立用逆转录病毒感染的方法成功建立了稳定高表达外源性Bmi-l的乳腺上皮细胞株76N-tert/Bmi-l和76R．30/Bmi-l；同时成功建立了Bmi-l-RNAi稳定起作用的乳腺癌细胞株MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi。嘌呤霉素筛选3天后，连续传代，检测第7代细胞中mRNA和蛋白水平Bmi-l的表达量，结果证实稳定细胞株的成功建立。 3．Bmi-l外源性高表达对76N-tert和76R-30生物学功能的影响与76N-tert/Vector和76R-30/Vector对照相比，侵袭浸润实验和划痕损伤实验均显示76N-tert/Bmi-l和76R-30/Bmi-l的侵袭运动能力明显提高，但软琼脂集落形成实验显示76N-tert/Bmi-l，76R-30/Bmi-l与76N-teWVector，76R-30/Vector均未有明显集落形成。 4．RNAi沉默内源性Bmi-l表达对MDA-MB-435S生物学功能的影响与MDA-MB-435S/Scr control RNAi对照相比，侵袭浸润实验和划痕损伤实验均显示MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi的侵袭运动能力明显降低，且其在裸鼠体内的肺转移能力较对照组而言也明显下降，虽然软琼脂集落形成实验显示MDA-MB-435S/Bmi-l-RNAi形成的克隆小于MDA-MB-435S/Scr control-RNAi形成的克隆，但裸鼠体内成瘤实验显示二者之间不存在明显差异。 5．Bmi-l在乳腺癌转移中的可能分子机制用RT-PCR和western blot检测肿瘤转移相关的一些信号通路，结果发现 Bmi-l可以通过调节AKT信号通路影响肿瘤细胞的侵袭转移能力及诱导EMT相关分子的表达，但至于如何作用于这些分子、是否还有其他作用分子及通过哪些信号通路影响肿瘤转移，均有待进一步深入研究。 结论 1.Bmi-l在乳腺癌中高表达且与TNM分期和淋巴结转移呈正相关，Bmi-l可以作为判断乳腺癌患者预后生存的独立指标，Bmi-l高表达提示预后较差； 2．Bmi-l在乳腺癌中可能作为一种肿瘤进展基因起作用，其不仅能诱导正常乳腺上皮细胞永生化，而且在乳腺癌发生转移的晚期阶段也起着重要作用； 3．Bmi-l可能通过作用于AKT信号通路对EMT的相关分子进行调控进而影响乳腺癌细胞的浸润转移能力； 4．Bmi-l有可能成为判断乳腺癌患者进展及预后的一个新分子标志物，为乳腺癌的预后判断及对其转移的有效预防和治疗提供了新的分子靶点。