牙鲆（Paralichthys olivaceus）是我国沿海岸分布的重要经济鱼类，在日本、韩国沿海也有分布。牙鲆个体硕大、肉质鲜美、营养价值很高，同时具有一定的药用价值，因而拥有广阔的市场。但由于过度捕捞和环境污染，造成自然资源大幅度衰减，供需矛盾较大，促使牙鲆人工养殖得到迅速的发展。由于牙鲆雌、雄性的生长差异，牙鲆的全雌化养殖成为研究的热点。雌核发育，根据处理原理的不同，可分为减数分裂雌核发育和有丝分裂雌核发育。鱼类的有丝分裂雌核发育能够产生纯合后代，即雌核发育双单倍体（Doubled Haploid，DH）。利用完全纯合的DH再次诱导雌核发育，可以获得克隆鱼。DH及其克隆系的纯合特性，决定了其在遗传和基因组研究以及鱼类育种方面，具有巨大的研究和应用价值。但由于DH的孵化率很低，成活率也不高，研究材料及其珍贵，故其性腺组织学研究还未见报道。本文利用微卫星标记方法对DH牙鲆进行了纯合性鉴定，并对其性腺进行了组织学观察，对其性比及性腺组织学特征进行了描述与分析，以期深入了解DH鱼类的生物学特征。通过紫外线照射真鲷(Pagrosomus major)精液，利用灭活的精子激活牙鲆的卵子，诱导牙鲆有丝分裂雌核发育。激活后的卵子静置3min后加入17℃海水培育60min，然后转移至静水压力机中，施加压力650kg/cm~2，持续6min，完成雌核发育诱导后，移至常温海水中孵化，之后在水泥池内培育2年，获得试验样本129尾。根据Genebank上公布的以及EST-SSR方法寻找微卫星标记，根据微卫星标记设计引物，之后利用牙鲆亲本基因组DNA对微卫星标记进行多态性筛选，筛选出的20个标记用于试验群体的纯合性鉴定：结果发现，这一群体的20个位点都是纯合的，纯合度很高，标记的分型结果可以用于基因连锁图谱的构建。组织学切片结果显示，在129尾样本中，雌性88尾，占试验群体总数的68%；雄性37尾，占试验群体总数的29%；无法区分雌雄的4尾，占试验群体总数的3%，雌雄比例约为1：0.42；对照组普通牙鲆的雌雄性比为55：45，接近1：1。DH的卵巢发育阶段基本一致，处于Ⅱ期。少数DH的卵巢发育正常，多数卵巢的卵母细胞结构发生变化，在胞核和胞质中都有体现，呈畸形发育，根据形态结构可分为7种类型。对照组卵巢发育至Ⅲ期，与对照组相比，DH的卵巢发育较迟缓。根据正常发育卵母细胞所占比例，定义正常卵母细胞比例在50%以上的卵巢为发育正常卵巢，少于50%的为发育异常卵巢。结果发现有82尾DH牙鲆的卵巢发育不正常，说明DH家系的雌性不育或者繁殖力低下。DH的精巢发育多停滞在Ⅱ期，精原细胞成簇分布于精小囊内，精小囊无腔隙，小叶间有结缔组织，精原细胞在小叶间成群排列，未有进一步的分化，说明雄性是不育的。少数精巢发育正常并具有精子，但与对照组精巢结构：精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞以及精子等相比，结构上有差异，精原细胞部分愈合，其它精细胞也较少。在DH的卵巢中观察到卵黄核的解聚过程，可能与脂肪的形成有关。在DH及对照中部分雄性个体的性腺中观察到少量的卵母细胞，为两性嵌合体，这与DH的基因纯合性无关，或许可能是牙鲆性腺发育中的一种性逆转现象。