论文部分内容阅读
研究背景系统性淀粉样变性病常常累及肾脏,预后差多进展为终末期肾脏病（ESRD）。根据构成前体蛋白不同,可分为多种类型,治疗方式及预后各不相同。淀粉样变分型诊断对治疗和预后是必要的。常规病理诊断技术存在潜在的诊断缺陷,基于激光微切割联合质谱分析（laser microdissection/mass spectrometry,LMD/MS）的蛋白质组学分析是一种新的淀粉样蛋白分类方法,目前尚未在临床广泛开展。目的以常规病理技术联合LMD/MS分析的分型结果为线索,分析比较321例不同类型淀粉样变性肾病患者临床及病理特点。方法（1）研究对象:选取2012年1月30日至2020年7月1日经郑州大学第一附属医院肾内科活检及外院送检确诊为淀粉样变性肾病患者321例。（2）常规病理技术分型及LMD/MS分析:肾组织标本刚果红染色（切片厚6um）行光镜及偏振光显微镜检查。直接法免疫荧光检测轻链蛋白κ、λ,免疫组化染色检测淀粉样蛋白A（AA）。电镜下观察淀粉样纤维丝的沉积情况。收集同期常规病理手段无法完成分型诊断的54例患者石蜡包埋病理标本。对已采集标本进行切片、脱蜡、染色处理,利用激光微切割系统获取刚果红染色阳性的淀粉样变性病变区域,完成蛋白提取、酶切、除盐、质谱检测、数据库搜索和数据分析,明确病变区域具体蛋白构成,进而确定淀粉样变性亚型。（3）收集321例淀粉样变性肾病患者临床资料:年龄、性别、病程（出现临床症状至确诊）、临床症状（水肿、乏力等）。生化指标包括血红蛋白、白蛋白、24小时尿蛋白定量、血肌酐、估算肾小球滤过率（eGFR）、补体C3、C4、肾病综合征诊断标准为:24小时尿蛋白定量>3.5g,血白蛋白<30g/L。肾功能不全定义为eGFR<60ml·min-1·（1.73 m2）-1（4）收集321例淀粉样变性肾病患者病理资料:由病理医师在未知诊断情况下重新阅片,对淀粉样物质在肾脏各部位沉积、肾间质纤维化、肾小管萎缩、炎细胞浸润进行半定量评分。（5）根据传统病理手段分型及质谱分析结果将淀粉样变性肾病患者进行分组,其中前体蛋白为AL/AH/AHL型淀粉样变性肾病患者为单克隆免疫球蛋白组,余其他亚型为非单克隆免疫球蛋白组。将单克隆免疫球蛋白组又分为AL组与AH/AHL亚组,比较不同组别淀粉样变性肾病患者临床与病理特征。结果（1）LMD/MS分析确诊率为100%,常规病理技术确诊率为83.18%。321例淀粉样变性肾病患者分型结果显示,AL型患者287例（89.41%）、AH/AHL型 23 例（7.17%）、AA 型 4 例（1.25%）、ATTR 型 2 例（0.62%）、AGel 型 2例（0.62%）、Alys 型 1 例（0.31%）、ALECT2型 1 例（0.31%）、ATTR+ALλ型1 例（0.31%）。（2）单克隆免疫球蛋白组与非单克隆免疫球蛋白组性别、年龄差异均无统计学意义,尿蛋白水平相似（均P>0.05）。与非单克隆免疫球蛋白组相比,单克隆免疫球蛋白组出现肾功能损伤比例更低,病理半定量评分结果显示单克隆免疫球蛋白组肾间质淀粉样物质（Intersitial amyloid deposition,IA）沉积更少,肾间质纤维化伴小管萎缩（Interstitial fibrosis and tubular atrophy,Ifib）、炎细胞浸润（Interstitial inflammatory infiltration,Iinf）程度更低,差异具有统计学意义（均P<0.05）。亚组分析显示,AH/AHL组患者较AL组肾间质纤维化伴小管萎缩（Ifib）程度较低,差异具有统计学意义（均P<0.05）。结论单克隆免疫球蛋白组临床及病理损伤改变较非单克隆免疫球蛋白型淀粉样变较轻,其中AH/AHL型淀粉样变损伤最轻。