烟粉虱Bemisia tabaci属半翅目粉虱科,是一个包含至少36个隐存种的隐存种复合群。烟粉虱通过多种方式对植物造成危害,其中以其传播菜豆金黄花叶病毒属病毒对作物造成的危害最大。番茄黄曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCY),作为该属中的一种植物病毒,对世界范围内主要番茄产区的生产造成严重危害。TYLCV在烟粉虱体内经过肠道、血淋巴以及唾液腺,最终随唾液一起被分泌至植物中。目前已有研究表明TYLCV在烟粉虱体中肠内利用跨细胞运输穿过上皮细胞,网格蛋白介导的胞吞参与这一过程,病毒粒子在中肠上皮细胞中的运输依赖于囊泡结构,尤其是早期内体及其管状网络。囊泡膜融合是囊泡运输的最后阶段,SNARE蛋白在囊泡膜融合中起着关键作用。目前关于SNARE蛋白如何影响病毒在细胞内的运输的研究还很少。本研究一方面利用显微注射的方法对烟粉虱成虫进行RNAi,构建烟粉虱成虫RNAi的技术体系。另一方面利用RNAi的方法沉默烟粉虱SNARE基因,确定影响烟粉虱获取TYLCV能力的SNARE基因,研究结果如下:分别利用显微注射法、喂食法(膜饲喂法)对烟粉虱成虫进行RNAi,通过比较表明显微注射进行RNAi的沉默效果高于喂食法进行RNAi的沉默效果,且烟粉虱不同基因RNAi的沉默效果也不同。通过沉默与质膜和早期内体相关的SNARE基因Syx1A,Syx2,VAMP2后,烟粉虱整虫的获毒量显著降低,抑制了烟粉虱对TYLCV的获取。推测TYLCV在烟粉虱体内运输可能与早期内体有关,并且可能参与质膜上的胞吐过程。通过沉默与晚期内体相关的SNARE基因VAMP7与Vti1b,烟粉虱的获毒量上升,推测晚期内体参与了TYLCV的降解。通过沉默与高尔基体相关的SNARE基因Syx6,Syx16,membrin后,烟粉虱的整虫获毒量显著上升,沉默Syx5后,烟粉虱的整虫获毒量显著降低,而沉默Vti1a,Sec22b,Ykt6,Gos28无影响,推测高尔基体可能参与了TYLCV的囊泡运输。分别用Rab5、Rab7、Rab11标记早期内体、晚期内体与循环内体,TYLCV与早期内体间存在明显的共定位现象,晚期内体与循环内体不存在共定位现象。推测TYLCV的运输可能与早期内体有关。综上所述,本研究利用显微注射法在烟粉虱成虫中成功构建一套成熟的RNAi体系,TYLCV在烟粉虱体内运输途径比较复杂,推测质膜、早期内体、晚期内体与高尔基体可能参与了TYLCV的囊泡运输。