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目的:灵芝(Ganoderma lucidum),别名灵芝草、木芝、菌灵芝等,是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的干燥子实体。灵芝在我国拥有数千年的药用历史,是传统的中药珍贵药材,具有很高的药用价值和保健价值。灵芝孢子粉(Ganoderma lucidum spore)是灵芝成熟期从菌盖喷发出的生殖细胞,具有灵芝的全部遗传活性物质。灵芝孢子粉含有三萜类、多糖类、脂肪酸类、氨基酸类、维生素类等有效成分,灵芝孢子在调节免疫、抗肿瘤的药效方面远远超过其母体灵芝。灵芝孢子油(Ganoderma lucidum sporeoil)是灵芝孢子粉经超临界CO2流体萃取所得的油脂混合物,主要含有甘油三酯类、脂肪酸类、三萜类、甾醇类等化学成分,具有显著的抗肿瘤、增强免疫调节、护肝等多种生物活性作用。近年来,灵芝孢子油及其制剂类产品大量涌入市场,列入高档保健品行列,拥有十分重要的社会价值和经济价值。但是到目前为止对灵芝孢子油的质量标准的研究报道较少,没有法定的质量标准,市场上的灵芝孢子油产品良莠不齐,伪品无法辨别。因此有必要对灵芝孢子油进行质量标准的研究,制定行之有效的质量控制方法,规范市场上灵芝孢子油的质量,保障人们用药安全有效,本课题在前期对灵芝孢子油化学成分进行深入研究的基础上,提出对灵芝孢子油的质量标准以及指纹图谱进行研究。方法:1、灵芝孢子油的质量标准研究建立灵芝孢子油质量标准的薄层定性鉴别方法,优化AgNO3-薄层硅胶板的制备方法,优化展开剂的溶剂系统,考察不同温度、湿度下的影响。建立HPLC-ELSD法对灵芝孢子油中最大成分1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯(孢子油甘油三酯F)的含量测定方法。2、灵芝孢子油的指纹图谱研究采用HPLC-ELSD法对11批灵芝孢子油样品中的不饱和甘油三酯类成分进行指纹图谱研究,运用指纹图谱参数和相似度进行评价分析,并采用SPSS软件对11批样品的指纹图谱所得的色谱峰进行主成分分析和聚类分析。3、初步起草灵芝孢子油质量标准草案参考《中国药典》2010版一部对中药质量标准的技术要求,结合灵芝孢子油为超临界二氧化碳萃取所得的油脂混合物,初步从性状鉴别、薄层鉴别、含量测定、指纹图谱等方面起草灵芝孢了油质量标准。结果:本实验对灵芝孢子油的质量控制采用定性鉴别与定量测定相结合的方法进行研究,完善灵芝孢子油的质量评价方法。薄层定性实验结果采用浸入法制备10%AgNO:r薄层硅胶板,展开剂为石油醚:乙酸乙酯(5:1),整体斑点清晰,分离效果较好,Rf分布合理。色谱条件为Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-异丙醇(51:49),ELSD为检测器,漂移管温度:40℃,流速:1mL · min-1,载气流速:2.4L · min-,进样量:20 μ L。用HPLC-ELSD法测得11批灵芝孢子油中1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯(孢子油甘油三酯F)的平均含量为26.8%。建立了灵芝孢子油的HPLC-ELSD指纹图谱方法,确定了 10个共有指纹峰,鉴定并归属了其中5个色谱峰,建立了灵芝孢子油的对照指纹图谱。指纹图谱的分析结果表明,11批灵芝孢子油指纹图谱的相似度在0.915～1之间。结论:本实验建立了灵芝孢子油的质量标准和HPLC-ELSD指纹图谱研究方法,具有方法简便、准确可靠、重复性好、特征性强等特点,可作为广州汉方现代中药研究开发有限公司对灵芝孢子油质量评价的重要依据之一。