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谷胱甘肽-S-转移酶融合表达系统是通过大肠杆菌进行蛋白表达、纯化和检测的重要系统。此系统表达的蛋白一般在N末端融合上可溶性谷胱甘肽-S-转移酶作为标签。由于谷胱甘肽-S-转移酶与谷胱甘肽能够特异性的结合,因此可以通过谷胱甘肽亲和层析介质对谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白进行分离、富集和纯化。以琼脂糖凝胶4 FF为基质,1,4-丁二醇二缩水甘油醚为活化剂,通过活化、偶联谷胱甘肽(GSH),优化活化及偶联条件,得到GSH亲和层析介质。实验结果表明：活化及偶联的优化条件为10 mL基质加入0.42gNaOH,15mLDMSO,15mLBDGE,反应温度为40℃,反应时间为6 h。在此条件下,环氧基修饰密度可达60-65 μmol/mL;当偶联溶液pH 6.5时,所制备的自制介质载量可达14.19±0.98 mg/mL。以此介质对谷胱甘肽-S-转移酶及融合蛋白进行纯化,结果表明该介质纯化效果较好、稳定性较搞,可重复使用。丙氨酸脱氢酶(alanine dehydrogenase, EC 1.4.1.1)是一种以烟酰胺腺嘌呤(NAD+)为辅酶的氨基酸脱氢酶,可逆催化丙氨酸的氧化脱氨反应生成丙酮酸,氨以及NADH。晶体结构解析酶蛋白空间结构为深入阐述酶的催化机理提供更为有利的条件。本文以巨大芽孢杆菌WSH-002菌株(Bacillus. Megaterium WSH-002,GenBankNo.345442329)基因组为模版,将目的基因克隆到表达载体,得到重组质粒pET-28a-Ald、 pGEX-6P-1/Ald,并分别转入到BL21(DE3), IPTG低温诱导后均为大量可溶性表达。菌体上清液分别经商业镍柱、自制GSH层析柱和尺寸排除色谱纯化后均获得高纯度的Ald WSH-002蛋白。对高纯度蛋白采用晶体生长试剂盒筛选初步结晶条件并优化。蛋白浓度为12 mg/mL,结晶溶液为0.03 M柠檬酸pH7.5,16%(w/v) PEG3350时,晶体衍射率为2.22A属于三方晶系；蛋白浓度15 mg/mL,结晶溶液为0.1M HEPES pH 8.0,12%(w/v) PEG 8000,8%(v/v) ethylene glycol,晶体衍射率为2.35A,属三方晶系。