不同光环境对兔视网膜生物钟基因Cry1、Cry2表达的影响及中药干预作用的研究

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目的:本课题通过动物实验研究,探讨不同光环境对兔视网膜生物钟基因Cry1、Cry2表达的影响。结合王育良教授提出的日钟阴阳理论,观察基于阴阳钟理论上的中药复方"日钟阴阳方"对不同光环境下兔视网膜钟基因Cry1、Cry2表达的干预作用。方法:72只1月龄雌雄兼备的新西兰幼兔,均为清洁动物,随机标号分为两大组,分别为4周组和12周组。两大组又随机分为6组,每组6只,即自然光组、正白光LED灯组、全光谱组、自然光中药组、正白光LED灯中药组和全光谱中药组。自然光组:饲养在正常自然光照射的环境中;正白光LED灯组:饲养在正白光LED灯照射的环境下;全光谱组;饲养在全光谱灯光环境中。各中药组:分别饲养在相应的光环境中,并饲养的同时分别予以"日钟阴阳方"灌胃,补阳方于每日10:00灌入,补阴方于每日22:00灌入。幼兔中药灌胃剂量参照《药理实验学》中人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值进行换算,按照70kg成人体重标准,一副中药颗粒以300ml水冲调,每日分两次口服计算,成人兔(1.5g)每次服药7ml,幼兔减半为每次3.5ml针管灌胃。自然光组、正白光LED灯组、全光谱组未予以生理盐水灌胃,正常饲养。测定实验光源的光谱参数。第4周、12周提取相应组兔视网膜钟基因Cry1、Cry2。结果:4周和12周后,RT-PCR基因定量检测基因含量,正白光LED灯组兔视网膜Cry1 mRNA、Cry2 mRNA水平皆明显降低(P<0.01),正白光LED灯中药组兔视网膜Cry1 mRNA、Cry2 mRNA含量显著高于正白光LED灯组(P<0.01)。而中药对自然光组和全光谱组兔视网膜Cry1 mRNA、Cry2 mRNA含量无影响(P>0.05)。免疫印迹法显示正白光LED灯组兔视网膜Cry1蛋白、Cry2蛋白水平皆明显降低(P<0.01),正白光LED灯中药组兔视网膜Cry1蛋白、Cry2蛋白含量显著高于正白光LED灯组(P<0.01)。而中药对自然光组和全光谱组兔视网膜Cry1蛋白、Cry2蛋白含量无影响(P>0.05)。结论:正白光LED灯对视网膜钟基因Cry1、Cry2表达水平具有一定的影响。全光谱灯对钟基因Cry1、Cry2表达的影响与自然光相似。"日钟阴阳方"对正白光LED灯下兔视网膜钟基因Cry1、Cry2的表达有一定的干预作用。
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