安脑平冲方对脑出血模型大鼠脑组织中转铁蛋白及其受体表达的影响

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目的:本研究通过建立脑出血大鼠模型,探讨安脑平冲方对脑出血模型大鼠脑组织中转铁蛋白及转铁蛋白受体表达的影响,明确安脑平冲方对脑出血后神经功能保护的作用机制,为中医治疗出血性卒中的临床应用提供实验数据和科学依据。方法:选用SD健康雄性大鼠240只,分为假手术组、模型组、安脑平冲方低剂量组、安脑平冲方中剂量组、安脑平冲方高剂量组、吡拉西坦组,每组设6h、72h、7d、14d四个时间点,每组20只大鼠。心脏采血50μl,采用二次注血退针法,注入大鼠右侧尾状核,建立脑出血大鼠模型。各组大鼠造模成功后3h首次灌胃给药,随后每隔24h灌胃给药1次。假手术组、模型组以蒸馏水灌胃。采用改良神经功能缺损评分法,评价各组大鼠不同时间点神经功能;通过HE染色,观察各组大鼠血肿周围脑组织及细胞的病理形态;通过铁染色法,测定各组大鼠血肿周围脑组织铁染色阳性颗粒密度值;采用WB技术,测定各组大鼠不同时间点转铁蛋白(Tf)和转铁蛋白受体(TfR)的蛋白表达水平,探讨安脑平冲方对脑出血模型大鼠脑组织中转铁蛋白、转铁蛋白受体表达的影响。结果:1.神经功能缺损评分结果表明:各组脑出血大鼠造模成功后,模型组及各药物组不同时间点的神经功能缺损评分均高于假手术组(P<0.01);与模型组比较,安脑平冲方低剂量组、安脑平冲方中剂量组、安脑平冲方高剂量组7d、14d的神经功能缺损评分均显著降低,有统计学意义(P<0.05);吡拉西坦组较模型组的神经功能缺损评分显著降低,有显著性差异(P<0.01)。2.组织形态学HE染色图片显示:假手术组6h、72h、7d、14d组织细胞形态正常;模型组6h出现纤维组织及细胞水肿,细胞核肿胀变形,核质淡染,72h见细胞肿胀变性、细胞皱缩,有少量坏死细胞,第7d细胞坏死明显,炎性细胞浸润。安脑平冲方低剂量组、中剂量组、高剂量组用药后7d、14d纤维组织及细胞水肿明显减轻,细胞损伤恢复,炎性细胞明显减少。3.铁染色后显微镜(×400倍)下观察装片,并采用IMAGE6.0图像分析系统对每张脑片中铁沉积的密度值进行分析,结果表明假手术组6h、72h、7d、14d有少量铁染色阳性颗粒;模型组6h可见铁染色阳性颗粒,72h时铁染色阳性颗粒密度值升高,第7d达峰值,第14d有所降低;各药物组及模型组不同时间点的铁染色阳性颗粒密度值均高于假手术组(P<0.01),各药物组不同时间点的铁染色阳性颗粒密度值较同期模型组均降低(P<0.05),以第7d、14d疗效显著(P<0.01)。4.血肿周围脑组织中TF和TfR蛋白的WB检测:结果表明模型组中各时间点Tf和TfR蛋白表达较假手术组明显升高,有显著性差异(P<0.01),安脑平冲方低剂量组、安脑平冲方中剂量组、安脑平冲方高剂量组以及吡拉西坦组TF和TfR蛋白表达较模型组降低,有统计学意义(P<0.05)。结论:1.安脑平冲方能改善脑出血模型大鼠神经功能缺损评分,减少血肿周围脑组织中铁沉积,降低血肿周围脑组织中转铁蛋白及转铁蛋白受体的表达,其中以安脑平冲方中剂量组用药后第7d、14d疗效更佳。2.安脑平冲方通过降低血肿周围脑组织中转铁蛋白及其受体的表达,减少血肿周围脑组织中铁沉积,减轻脑组织及神经细胞损伤,起到神经功能保护作用。
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