【摘 要】
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该实验室曾以水稻蜡质基因(Waxy)5上游区中的31bp序列(-839bp~-809bp)为鱼饵,用酵母单杂交系统从水稻cDNA文库中筛选到几个阳性克隆,其中一个为c89.用c89cDAN为探针筛选水稻
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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该实验室曾以水稻蜡质基因(Waxy)5上游区中的31bp序列(-839bp~-809bp)为鱼饵,用酵母单杂交系统从水稻cDNA文库中筛选到几个阳性克隆,其中一个为c89.用c89cDAN为探针筛选水稻基因组文库获得了含有全部编码区和约1.2 kb的上游调控区的基因组克隆.序列同源性比较显示它是EREBP转录因子家族的一个新成员,将该基因称为OsEBP-89.该文在此工作的基础上,围绕OsEBP-89基因的结构和表达进行了一些研究.主要在以下几方面取得了进展:1. OsEBP-89是一个具有DNA结合域和转录激活功能域的EREBP类转录因子.用凝胶滞后和同源序列竞争试验,检测到大肠杆菌中表达的pC89蛋白具有DNA结合能力,它能够与AP2/EREBP转录因子家族识别的保守序列GCC box特异性结合.通过酶母单杂交实验,确定了OsEBP-89蛋白中N末端富含酸性氨基酸和丝氨酸的区域具有转录激活的功能.2. OsEBP-89基因在水稻根、茎、叶和种子中的表达模式.Northern杂交的结果显示OsEBP-89基因在水稻的根、根茎结合部、叶鞘、叶片、茎、幼穗、小花、胚乳和幼胚中都有表达,叶片、幼穗和小花中表达相对较弱.3. OsEBP-89基因受多种激素诱导表达.通过Northern杂交和pNSG转基因水稻植株的组织化学染色,分析了不同激素处理时OsEBP-89基因的应答情况.4. OsEBP-89基因启动子的分析,诱导5上游调控区缺失片段驱动GUS报告基因表达和RT-PCR的方法并参照mRNA的分子量,确定了OsEBP-89基因的转录起始位置.
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