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动脉血栓形成是急性心肌梗塞和脑梗死的主要诱因,也是发达国家最常见的死亡原因。组织因子(TF)是生理性止血和病理性形成血栓的启动因子,它在血栓形成中的起始作用越来越受到人们的重视。单核细胞作为动脉粥样硬化斑块中TF来源的细胞-泡沫细胞的前身,研究其TF的表达调控机制已经成为当前临床医学的热点之一。国内外大量研究表明,不稳定型心绞痛、急性冠状动脉综合症、高血压和高血脂等心脑血管疾病患者血液中单核细胞的TF都处在高表达的水平;同时发现,具有抗血栓作用以及血管内皮保护功能的KLF2基因在急性冠状动脉综合症病人的单核细胞中表达明显下调。因此,本研究旨在构建pEGFP-N3-KLF2高表达载体,并且观察LPS对KLF2高表达载体转染的THP-1细胞表达TF的影响,为丰富凝血理论提供新的实验依据。目的:构建pEGFP-N3-KLF2高表达载体,并且观察LPS对KLF2高表达载体转染的THP-1细胞表达TF的影响。方法:从NCBI获得klf2基因序列,运用premier5.0软件设计引物,运用PCR技术扩增klf2基因,电泳检测正确后,进行纯化回收,然后将纯化回收产物连pEGFP-N3载体进行转化,再挑单克隆以及摇菌,小提质粒,最后进行双酶切检测和PCR检测,当两项结果均正确时,送pEGFP-N3-KLF2新鲜菌液去测序。将单核细胞分为5组:①正常细胞组,②转染空质粒组,③转染高表达质粒组,④LPS组,⑤LPS+转染高表达质粒组。分别培养2 h、12 h、24 h、48 h和72 h后,用流式细胞术检测各组各时间点TF蛋白表达变化。结果:阳性克隆筛选和测序结果显示,pE-GFP-N3-KLF2高表达载体构建成功。在实验观察的2h至72h内,正常组细胞各时间点TF表达基本一致,各观察点间比较差异无统计学差异;与正常对照组相比,空载体组和高表达转染质粒组TF表达也无显著性差异(P>0.05)。LPS组表达TF从12h起明显增加,至48h达到高峰,与对照组相比,差异具有统计学差异(p<0.01),而LPS+高表达转染质粒组TF表达量明显降低,与LPS组同一时间点的TF表达量相比,差异具有显著性意义(P<0.01)。结论:①利用具有标志绿色荧光蛋白的pEGFP-N3质粒载体构建了KLF2高表达质粒,并经测序鉴定后pEGFP-N3-KLF2高表达质粒载体构建成功。②LPS能显著地刺激THP-1表达TF,但这种诱导作用可被转染KLF2高表达的质粒所抑制。