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目的:检测胰腺腺癌上调因子(pancreatic adenocarcinoma up-regulated factor,PAUF)和β-连环蛋白(β-catenin)在结肠癌患者中的表达情况,并通过RNA干扰靶向沉默PAUF表达,观察其对人结肠癌细胞HCT116增殖凋亡及侵袭能力的影响,探讨PAUF基因在结肠癌中的作用,为进一步研究结肠癌的基因治疗奠定基础。方法:1.收集48例结肠癌标本,每份标本同时收取肿瘤组织和癌旁正常组织。分别采用RT-PCR,免疫组化检测各组织中PAUF和β-catenin的表达水平。培养5株结直肠癌细胞株,RT-PCR检测各细胞株中PAUF表达水平,进而筛选出高表达细胞株HCT116以备后续实验用。2.以脂质体(lipofectamineTM2000)为载体将带荧光标记的siRNA转染HCT116细胞并用流式细胞仪检测从而筛选出最佳转染条件。设计制备针对PAUF基因的3组不同小干扰RNA序列,以最佳转染条件转染细胞后分别采用RT-PCR以及Western法验证干扰效果并进而筛选出最佳干扰片段以备后续实验用。3.将先前筛选出的最佳干扰片段PAUF-siRNA2按最佳转染条件对PAUF高表达细胞株HCT116进行RNA干扰,再分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,流式细胞术(FCM),侵袭实验,粘附实验,迁移实验检测RNA沉默PAUF后对结肠癌HCT116细胞增殖,凋亡、周期及侵袭、粘附、迁移性的影响。结果:1.癌旁组织中PAUF和β-catenin的表达量明显低于肿瘤组织(P <0.05)。并且,在肿瘤组织和癌旁组织中PAUF的表达与β-catenin的表达均呈现相关性(P <0.05)。 PAUF在5株结直肠癌细胞中均有不同程度的表达,但在HCT116中表达量最高。2.细胞数约为每孔1.5×105个、siRNA浓度约为80pmol,Lipofectamine2000与siRNA比例为4ul:4ul(6孔板)时,有较佳的转染效率,继续提高siRNA浓度并不能明显提高转染效率。将三组siRNA转染细胞后PAUF表达量均有不同程度下降,其中以PAUF-siRNA2干扰效果最明显,转染细胞后PAUF和β-catenin的mRNA和蛋白表达明显下降。3.转染了PAUF-siRNA2的结肠癌细胞HCT116吸光度值降低,增殖活力下降,生长缓慢,细胞凋亡增加,且大部分停留在G2/M期,同时,细胞的侵袭、粘附及迁移性减低。结论:PAUF基因在结肠癌中高表达,沉默PAUF基因能使PAUF和β-catenin的表达明显下降,进而抑制结肠癌细胞株HCT116增殖并加速其凋亡,其周期大部分阻滞于G2/M期,同时其细胞的侵袭、粘附及迁移性减低。提示PAUF-siRNA能影响结肠癌细胞株中WNT/β-catenin通路的信号传导,通过靶向沉默PAUF基因,进而下调β-catenin分子的表达,抑制原癌基因激活,有可能成为靶向治疗结肠癌的新策略。