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目的：筛选我院监护病房分离的产金属β-内酰胺酶（MBL）嗜麦芽窄食单胞菌株，调查产酶株对抗菌药物的耐药性，了解其分子流行病学特征；检测MBL的等电点及酶对抗生素的稳定性；检测MBL的编码基因，进行序列分析，明确酶基因表型；构建含嗜麦芽窄食单胞菌MBL编码基因的重组体，并在E. coli BL21中表达，从基因和蛋白水平明确MBL在细菌耐药机制中所起的作用。方法：收集1998年1月-2001年12月重庆医科大学附属第一医院监护病房临床分离得到的422株革兰阴性杆菌。用E试验法测定10种抗菌药物对细菌的抗菌活性，筛选耐亚胺培南的产MBL可疑菌株；以Na2EDTA和2－巯基丙酸（2－MPA）为酶抑制剂的纸片协同法，并结合MBL-E试验法进行产MBL菌株确证；肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR)方法确定产MBL菌株的基因型，了解菌株来源、药敏谱和基因型与之间的关系；分光光度法测定MBL阳性菌株所产β-内酰胺酶的对亚胺培南的稳定性；测定金属β-内酰胺酶的等电点（pI）；并检测金属β-内酰胺酶对多种抗生素及酶抑制剂的酶稳定性及抑酶效应；挑选其中3株不同基因型、高产亚胺培南水解酶的菌株，设计能扩增编码嗜麦芽窄食单胞菌MBL全基因的通用引物，以染色体DNA为模版进行PCR扩增，产物克隆、测序。以表达质粒pET32a(+)为载体，构建含目的基因片段的重组体，转化大肠杆菌<WP=10>BL21（DE3）并表达，比较表达体与原菌株对亚胺培南和头孢他啶的敏感性。结果: 亚胺培南对所有菌株的耐药率最低，为11.6%;耐亚胺培南菌株主要分布于嗜麦芽窄食单胞菌和铜绿假单胞菌，耐药率分别为83.3%（25/30）和16.9%（11/65）。以Na2EDTA和2-MPA为酶抑制剂，用纸片协同法从49株亚胺培南耐药株中分别检测到MBL阳性株4株和7株，均为嗜麦芽窄食单胞菌；MBL-E试验法共检测出MBL阳性株12株，11株为嗜麦芽窄食单胞菌，1株为铜绿假单胞菌。ERIC-PCR结果显示，13株产MBL嗜麦芽窄食单胞菌（含2株阳性对照株）具有10种基因型，其中4株MBL阳性株为同一基因型，其余9株为独立的基因型。13株MBL阳性株对亚胺培南、庆大霉素、阿米卡星、头孢噻肟和头孢曲松完全耐药，对哌拉西林／他唑巴坦、替卡西林／克拉维酸、头孢哌酮／舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟及环丙沙星等6种抗菌药物呈现8种耐药模式，菌株来源、药敏谱和基因型与之间无显著相关性。挑选3株不同基因型、高产亚胺培南水解酶的菌株，测定其酶等电点，2株菌(710、750)所产酶的pI为6.6，1株菌（603）的PI为6.2和8.4；EDTA抑制试验证实pI 6.6和PI 6.2均为金属β-内酰胺酶。酶稳定性试验表明，以对亚胺培南的水解率为100%为基准，嗜麦芽窄食单胞菌所产金属β-内酰胺酶对青霉素的相对水解率最高，达到1400%，其次是氨苄西林、苯唑西林、头孢唑林，相对水解率分别<WP=11>为680%、420%和190%，对拉氧头孢、头孢他啶、氨曲南的相对水解率较低，分别为27%、9%、1%。三种常用β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦都不能抑制金属β-内酰胺酶。PCR结果显示，750和710菌携带金属β-内酰胺酶编码基因（blaMBL），长度均为867bp。经GeneBank网上同源性比较，发现与金属酶L1的编码基因blaS（注册号AJ291672.1）和blaL1(AF010282.1)的核苷酸序列同源性均为99.31%。含目的基因的pET32a(+)重组载体转化大肠杆菌BL21（DE3）后，经IPTG 诱导后， SDS-PAGE分析发现，融合基因表达的蛋白为48KDa，其中pET32a（+）表达的蛋白约为22kDa，酶蛋白约为26 kDa，与金属酶L1的分子量（24~26 kDa）相符。药敏结果显示，表达体与原菌株对亚胺培南（IP）的MIC分别为12mg/L和128mg/L，对头孢他啶（TZ）的MIC均为2mg/L；用MBL- E试条检测，表达体为MBL阳性。结论：我院监护病房分离的革兰阴性杆菌产MBL株主要集中于嗜麦芽窄食单胞菌，菌株来源呈高度的异源性；菌株710和750所产MBL与文献报道的L1型金属β-内酰胺酶的酶学特性和基因表型相似，而菌株603所产金属β-内酰胺酶为非L1型酶，其分子生物学特性有待明确。