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目的：
1.用毕赤酵母表达系统表达HSV-1型特异性抗原gGl，为建立ELISAHSV-1型特异性检测诊断试剂盒奠定基础；
2.探讨gGl蛋白在原核表达系统中的表达及抗原性分析。
方法:
1.HSV-1包膜糖蛋白gGl在毕赤酵母表达系统中的表达
1.1获得目的基因、构建克隆载体pMD18-T-gGl
根据GenBankgGl基因全序列设计引物，以HSV-1之细胞增殖物提取的总DNA作为模板，PCR扩增目的基因，连接于pMD18-T载体，转化TOP10，提取质粒做EcoRI、NotI双酶切鉴定并委托测序。
1.2构建表达载体pPIC9K-gGl
将EcoRI、NotI双酶切目的基因与经相同双酶切的pPIC9K质粒连接，转化TOP10，双酶切鉴定重组质粒。
1.3电转化毕赤酵母GS115
SalI酶切线性化表达质粒pPIC9K-gGl，电转化毕赤酵母GS115。转化条件为1.8kV、5ms，连续电击两次。取转化物涂布MD平板，30℃培养。
1.4多拷贝转化子的筛选及诱导表达
挑取MD平板上单菌落约100个，依次接种至含G4180.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL的YPD平板，30℃培养。挑取抗2mg/mLG418的菌落，1％甲醇诱导表达，每24h取样一次，上清-20℃保存，待鉴定。
1.5表达条件的优化
将工程菌换用不同的诱导体系、加不同量的诱导剂后诱导表达，每24h取样一次，电泳观察蛋白量的变化。
1.6表达产物的鉴定
用SDS-PAGE电泳分析蛋白的表达情况，用间接ELISA法分析抗原的敏感性和特异性。
2.HSV-1包膜糖蛋白gGlP在原核表达系统中的表达
2.1获得目的基因、构建克隆载体pMD18-T-gGlP
根据文献选取gGl基因序列亲水性强、抗原表位集中的片段，设计引物。以pMD18-T-gGl为模板，PCR方法扩增目的基因，连接于pMD18-T载体，转化TOP10感受态菌株，PCR鉴定。
2.2HSV-1gGlP表达载体PBV220-gGlP的构建
提取质粒pMD18-T-gGlP，与表达载体同时以EcoRI、BamHI双酶切，构建表达载体PBV220-gGlP，转化大肠杆菌DH5α，双酶切鉴定并委托测序。
2.3gGlP蛋白的表达及表达产物的鉴定
42℃诱导表达，SOS-PAGE电泳检测表达情况，Westernblot方法检测其抗原性。
结果:
1.实现HSV-1包膜糖蛋白gGl在毕赤酵母表达系统中的表达
1.1获得目的基因、构建了克隆载体pMD1.8-T-gGl
PCR方法获得gGl基因全序列，构建了pMD18-T-gGl，双酶切后电泳显示在726bp、2700bp左右获得2条电泳带，大小与目的DNA和载体片段长度相符。测序结果显示目的基因序列与Genbank标准序列(HSV-lstocker株gGl)99％同源。
1.2构建了表达载体pPIC9K-gGl
pPIC9K-gGl经EcoRI和NotI双酶切，电泳显示在726bp、9000bp左右获得2条电泳带，大小与目的DNA和载体片段长度相符。
1.3电转化毕赤酵母GS115
SalI酶切线性化pPIC9K-gGl，电转化毕赤酵母GS115。取转化物涂布MD平板，30℃培养3d，MD平板上长出多个单菌落。
1.4筛选多拷贝转化子及诱导表达
MD平板上长出的菌落经G418加压筛选，在抗2mg/mlG418转化子中筛选出6个多拷贝转化子用于诱导表达实验。
1.5表达条件的优化
SDS-PAGE电泳结果显示，将工程菌换用不同的诱导体系、加不同量的诱导剂后，表达蛋白量并没有随诱导条件改变的增加。
1.6表达产物的鉴定
甲醇诱导培养96h后，将培养上清SDS-PAGE电泳，在59kDa出现电泳条带，大小与预期目的蛋白一致；将重组蛋白gGl作为抗原试剂做间接ELISA试验结果发现，P/N为4.12(0.70/0.17)，是全病毒抗原(0.41/0.16=2.56)的1.61倍，两者相比，重组抗原具有更好的抗原性。
2.实现HSV-1包膜糖蛋白gGlP在原核表达系统中的表达
2.1获得目的基因、构建了克隆载体pMD18-T-gGlP
PCR获得目的基因，构建pMD18-T-gGlP，并转化到TOP10感受态菌株，获得阳性克隆。
2.2构建了HSV-1gGlP表达载体PBV220-gGlP
构建了表达载体PBV220-gGlP，双酶切电泳显示在393bp、3600bp左右获得2条电泳带，大小与目的DNA和载体片段长度相符；测序结果显示PBV220-gGlP目的基因序列与Genbank标准序列(HSV-lstocker株gGl)99％同源。
2.3gGlP蛋白的表达及表达产物的鉴定
42℃诱导表达，SDS-PAGE电泳显示在14kD出现目的条带，大小与预期一致，Westernblot方法检测其具有良好的抗原性。
结论:
1.用毕赤酵母表达系统表达了目的蛋白gGl，经初步分析表明，重组抗原比全病毒抗原具有更好的抗原性，但表达量低。
2.用原核表达载体PBV220成功表达了截短目的蛋白gGlP，Westernblot方法检测其具有良好的抗原性，且表达量高。