本试验以牡丹种子和土芽为外植体进行研究。包括:牡丹无菌培养体系建立;牡丹子叶诱导分化过程中生理生化变化;牡丹增殖技术;牡丹试管玻璃化苗的形态解剖、生理生化、控制方法。试验结果如下:1 .初代培养:牡丹种子萌发培养最优培养基为: MS+6-BA1.0 mg·L^-1+TDZ0.25 mg·L^-1。土芽最优培养基为:MS+6-BA 0.5 mg·L^-1+GA30.25 mg·L^-1。2 .牡丹子叶愈伤组织诱导及分化最优培养基为: MS+6-BA0.5 mg·L^-1+TDZ0.25 mg·L^-1+2,4-D1.5 mg·L^-1。牡丹再生苗诱导生根最优培养基为:1/2MS+6-BA1.0 mg·L^-1+IBA4.0 mg·L^-1。‘太阳’与‘凤丹白’子叶愈伤分化芽过程中生理生化变化结果是:两种愈伤组织随着培养时间增加,生理指标差异越来越显著,能分化出芽的愈伤组织比不能分化出芽的愈伤组织内部代谢增强,呈明显的上升趋势,不能分化出芽的愈伤组织中的各项指标的变化比较平缓。3.牡丹增殖培养:先采用单因素试验,选取试验因素与水平,进行响应面分析。在分析各因素之间的显著性及交互作用的基础上,得出最优培养基是:BA1.05 mg·L^-1+KT0.41 mg·L^-1+NAA0.77 mg·L^-1+TDZ0.05 mg·L^-1,结果增殖系数可提高原来的4.36倍。牡丹增殖苗生根最优培养基是:1/2MS+6-BA2.0 mg·L^-1+NAA0.2 mg·L^-1+IBA3.0 mg·L^-1,其中IBA为主要影响因素,在此条件下,‘彩绘’的生根率可以达到57.98 %。4.牡丹试管玻璃化苗与正常苗的形态解剖结构有很大差异。形态学区别是:正常苗叶片薄而平展,植株生长健壮;玻璃化苗叶片狭小皱缩并纵向卷曲,整个植株茎透明肿胀,矮小。细胞学区别是:正常苗细胞间隙小,排列紧密,叶绿体数量多;玻璃化苗细胞间隙大,细胞内出现较大的空洞,叶绿体数量少。5.牡丹正常苗与不同程度玻璃化苗的生理生化变化是:与正常苗相比,玻璃化苗是随着玻璃化程度的增加,叶绿素含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、还原糖含量、CAT酶活性、PAL酶活性逐渐减少,而玻璃化苗的POD酶活性与含水量,是随着玻璃化程度的增加,而升高。6.防止牡丹玻璃化发生的主要措施有:（1）采用透气性好的棉塞,可将玻璃化率控制到6.8 %;（2）PVA提高到3 g·L^-1,可将玻璃率控制到10.7 %;（3）pH调至6.6,玻璃化率可控制到13.7 %;（4）在2月取材,玻璃率控制到3.3 %;（5）活性炭添加为4⁶ g·L^-1,无玻璃化出现;（6）每隔10 d转接一次新培养基时,无玻璃化出现;（7）每瓶接2个芽,玻璃率控制到3.3 %;（8）葡萄糖做碳源、B₅培养基、MS中的KH₂PO₄加倍作处理时,不能降低玻璃化率,对控制牡丹玻璃化的发生没有明显影响。