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目的:通过观察黄芪及其提取物对体外培养的大鼠肺成纤维细胞增殖及角化生长因子(KGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨黄芪及其提取物治疗肺纤维化的机制,并为开发其有效成分提供实验依据。
方法:(1)将60只SPF级大鼠随机分为黄芪煎液组,黄芪总皂苷组,黄芪总黄酮组,黄芪多糖组,地塞米松组,生理盐水组等6组,制备血清。(2)分离、培养并鉴定大鼠肺成纤维细胞,选用生长良好的3代细胞,分为6组:黄芪煎液组,黄芪总皂苷组,黄芪总黄酮组,黄芪多糖组,地塞米松对照组,空白对照组,加入相应血清。用形态学和免疫组化鉴定成纤维细胞;台盼蓝排斥试验法测定细胞活力;MTT法检测细胞抑制率;免疫组化法检测细胞中KGF的表达;ELJSA法检测细胞培养液中TNF-α的表达。
结果:(1)波形蛋白表达阳性,结合组织来源与细胞生物学特性确认为肺成纤维细胞;(2)0.4%台盼蓝测定细胞活力>95%;(3)在48~72小时,与空白对照组相比,黄芪煎液组,黄芪总皂苷组,黄芪总黄酮组,地塞米松组对大鼠肺成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01),黄芪多糖组有抑制作用P<0.05);与地塞米松组相比,黄芪煎液组,黄芪总皂苷组,黄芪总黄酮组无显著差异(P>0.05)而黄芪多糖组抑制率较低P<0.05);(4)与空白对照组相比,黄芪煎液组,黄芪总皂苷组,黄芪总黄酮组KGF表达明显增强P<0.01),黄芪多糖组及地塞米松组增强(P<0.05);与地塞米松组相比,黄芪煎液组,黄芪总皂苷组,黄芪总黄酮组KGF表达较强(P<0.05)而黄芪多糖组无显著差异P>0.05);(5)与空白对照组相比,黄芪煎液组,黄芪总皂苷组,黄芪总黄酮组TNF-α的表达很低P<0.01),黄芪多糖组及地塞米松组表达低(P<0.05);与地塞米松组相比,黄芪煎液组,黄芪总皂苷组,黄芪总黄酮组表达低(P<0.05)而黄芪多糖组无显著差异(P>0.05)。
结论:1、黄芪及其提取物可以抑制大鼠肺成纤维细胞的增殖,其中黄芪煎液、黄芪总皂苷、黄芪总黄酮的效果明显优于黄芪多糖。
2、黄芪及其提取物可以降低大鼠肺成纤维细胞培养液中TNF-α的表达,同时提高大鼠肺成纤维细胞中KGF的表达。提示黄芪及其提取物治疗肺纤维化的机制可能与调整细胞因子,维持细胞因子之间的平衡有关。