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[目的]胞红蛋白(cytoglobin,CYGB)是一种新发现的携氧球蛋白,CYGB在神经细胞缺氧时表达明显增加并具有明显的细胞保护作用。本文探讨巨噬细胞氧化应激过程中CYGB表达模式;构建CYGB过表达/低表达巨噬细胞模型,研究CYGB在氧化应激过程中对巨噬细胞的作用。[方法]1、将小鼠巨噬细胞株RAW264.7、人巨噬细胞株THP-1、EC及人肝癌细胞Hep G2扩增后,Western blot检测正常生理状态下RAW264.7、THP-1、EC及Hep G2细胞中CYGB蛋白的表达水平。2、将小鼠巨噬细胞株RAW264.7扩增后,Western blot检测RAW264.7在H2O2刺激不同时间时CYGB的蛋白表达水平:分为4组:对照组,0.5mmol/L H2O2处理6、12、24 h组。Western blot检测RAW264.7在不同浓度H2O2刺激12h时CYGB蛋白的表达水平:分为4组:对照组,0.25mmol/L H2O2、0.5mmol/L H2O2、1mmol/L H2O2处理组。3、首先构建CYGB过表达/低表达巨噬细胞模型。然后观察在氧化应激过程中CYGB对RAW264.7小鼠巨噬细胞的作用,将RAW264.7细胞分为4组:对照组、0.5mmol/L H2O2处理组、0.5mmol/L H2O2+CYGB过表达组及0.5mmol/L H2O2+CYGB低表达组。于12h后,检测CYGB蛋白水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、乳酸脱氢(LDH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD);荧光定量PCR检测CYGB、NF-κB在细胞中的表达。[结果]1、Western blot结果显示:在正常生理状态下,CYGB在小鼠巨噬细胞株RAW264.7、人巨噬细胞株THP-1、人脐静脉内皮细胞EC及人肝癌细胞Hep G2中均有表达。2、Western blot结果显示:H2O2处理6、12、24 h组CYGB表达水平高于对照组,并且在12h组CYGB表达水平最高,差异有统计学意义(P<0.05)。0.25mmol/L H2O2、0.5mmol/L H2O2和1mmol/L H2O2处理巨噬细胞12h后CYGB表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3、荧光显微镜结果显示:转染CYGB过表达质粒及CYGB低表达质粒的巨噬细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光。4、Western blot结果显示:0.5mmol/L H2O2处理组、0.5mmol/L H2O2+CYGB过表达组及0.5mmol/L H2O2+CYGB低表达组CYGB蛋白表达水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。0.5mmol/L H2O2+CYGB过表达组的CYGB表达最高(P<0.05),0.5mmol/L H2O2+CYGB低表达组的CYGB表达较0.5mmol/L H2O2处理组低,差异有统计学意义(P<0.05)。酶联免疫吸附测定法(ELISA)和ROS检测结果显示:与0.5mmol/L H2O2相比,0.5mmol/L H2O2+CYGB过表达组中GSH-PX、SOD升高,LDH、MDA、ROS下降;与0.5mmol/L H2O2组相比,0.5mmol/L H2O2+CYGB低表达组中GSH-PX、SOD下降,LDH、MDA、ROS升高。荧光定量PCR检测显示:与正常对照组比较,H2O2处理组CYGB和NF-κB表达均上调(P<0.05)。与H2O2对照组比较,CYGB过表达组CYGB表达较高,NF-κB表达较低(P<0.05);CYGB低表达组CYGB表达较低,NF-κB表达较高(P<0.05)。[结论]1.CYGB在巨噬细胞中表达,在H2O2刺激时表达水平增加。2.CYGB在巨噬细胞氧化应激损伤过程中具有细胞保护作用。