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大疱性类天疱疮(Bullous Pemphigoid, BP)是一种皮肤水疱性自身免疫性疾病,其主要症状表现为张力性水疱的形成、表皮和真皮的分离、严重的炎症细胞浸润及半桥粒和细胞外基质的破坏,该病的发生和抗半桥粒蛋白BP180和BP230的自身性抗体有关。通过IgG被动转移动物模型,我们了解到一些BP的发病机制。在BP的IgG被动转移动物模型中,抗BP180的IgG诱导水疱的形成,而水疱的形成依赖于补体的激活、肥大细胞的脱颗粒和嗜中性粒细胞的浸润。此外,在BP病人和实验动物的水疱液中还发现了许多蛋白水解酶,如血纤维蛋白酶、胶原蛋白酶、嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(Neutrophil Elastase, NE)和基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase, MMP-9)的存在。由于这些蛋白水解酶能够降解细胞外基质组分,因此他们对于BP水疱的形成有重要的作用。如果能够找到这些蛋白酶在BP中产生及参与病症的途径,并抑制这些途径的发生,则对BP的治疗具有很大的帮助。本论文通过基因敲除和炎症细胞重建的方法分析了NE和肥大细胞蛋白酶-4(Mouse mast cell protease-4, mMCP-4)在BP动物模型中参与疾病发生的机制,更重要的是这一发现为BP的治疗提供了潜在的靶点。我们的实验结果显示NE能够降解鼠BP180重组蛋白,其酶切位点在BP180细胞外结构域的第506和561号氨基酸上,产生的小肽分别命名为p506和p561。在体内和体外的实验结果都表明,p561小肽对嗜中性粒细胞有趋化活性。向B6小鼠体内局部注射NE能够将嗜中性粒细胞招募至皮肤,而如果向小鼠体内同时注射NE的抑制剂α1-PI(al-proteinase inhibitor)则无嗜中性粒细胞的浸润。更重要的是,NE能够直接降解人和鼠的BP180以及天然状态存在的人BP180三聚体分子。这些结果表明：1)NE能够直接造成细胞外基质的损伤；2)NE降解BP180后产生具有嗜中性粒细胞趋化活性的小肽,这个小肽能够加重发病初期的病症强度。除了NE外,mMCP-4也和许多自身免疫性疾病和炎症反应有关,然而其参与疾病的机制尚不清楚。在实验中,我们发现mMCP-4对于自身免疫性疾病BP动物模型中水疱的形成至关重要。mMCP-4缺陷型小鼠能够抑制BP的发生,但mMCP-4-/-小鼠中补体的激活、肥大细胞的脱颗粒和嗜中性粒细胞的早期浸润都和野生型类似。而向mMCP-4-/-小鼠体内注射致病性IgG后,由于mMCP-4的缺失,激活的MMP-9的量明显低于野生型。野生型和mMCP-4-/-小鼠的肥大细胞重建不能完全恢复激活的MMP.9的数量。在mMCP-4-/-(?)勺小鼠体内重建mMCP-4+/+小鼠的肥大细胞,能够使机体产生水疱和嗜中性粒细胞的浸润,而重建mMCP-4-/-小鼠的肥大细胞则不能。mMCP-4也能够在体内和体外降解半桥粒蛋白BP180,并造成表皮和真皮的分离。这些实验结果表明,mMCP-4在BP的发病机制中发挥两个作用：它既能够激活MMP-9,又能直接降解BP180,从而造成半桥粒和基底膜的细胞外基质损伤。