论文部分内容阅读
艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV-1和HIV-2，主要为HIV-1)感染引起的一种后天性人类免疫缺陷综合征。目前用于抑制HIV-1的治疗药物主要针对病毒反转录酶和蛋白酶。尽管这些药物可以减缓HIV-1感染者向AIDS患者发展的进程，但长期使用存在副作用大、价格昂贵、易产生耐药性等缺点。因此，寻找有效而安全的治疗AIDS的药物成为当务之急。 随着对HIV-1进攻靶细胞过程的深入了解，人们不断发现新的极具吸引力的药物靶点，并为研制有效疫苗提供了新的策略。HIV-1属于囊膜病毒，其囊膜蛋白复合物控制着病毒进入靶细胞的关键步骤，即决定着病毒趋向性和促进病毒基因组进入靶细胞以及感染细胞与邻近的非感染的细胞之间的膜融合过程。 介导病毒膜与靶细胞膜融合的关键分子是HIV-1囊膜糖蛋白 第四军医大学硕士学位论文gp41，其结构相对保守，针对gP41的药物可能避免耐药性的形成，是抑制病毒进入靶细胞的理想靶位。gp41的晶体结构已经明确，其融合活性构象的核心结构是一个由三个发卡结构紧密排列而成的六聚体螺旋束，gP41的N端螺旋形成中心的三聚体，而C端螺旋以反平行方式堆积在N端螺旋形成的疏水槽表面，组成外层的三聚体螺旋。该空间构象己被证实是促使病毒与靶细胞膜融合的关键构象，结构十分稳定。 Nsl(L6)e46和N36(L6)e34均为模拟gp41融合态核心结构空f司构象的合成肤。Nsl(L6)C46是在N36(L6)C34基础上在C末端增加了一个含有中和表位ELDKWA序列的12月太序列。它们的一级序列与具有抑制活性的C多肤重叠。Jiang等针对N36(L6)C34合成肤研制了单克隆抗体(MAb)NC一1。该MAb能特异识别Hlv一1 gp41六股。一螺旋束核心结构空间构型，但未显示中和活性。 本研究首先运用原核表达系统表达了N51(L6)C46多肤，并用能特异识别Hlv一1 gP41三聚体特征性的六股。一螺旋束核心结构空间构型的MAb NC一l进行Western blot鉴定，证实Nsl(L6)C46多肤单体(14KDa)及其三聚体(36KDa)与MAb NC一1反应，提示该多肤可形成gp41核心结构空间构型特征，结构稳定，SDS、二琉基乙醇的存在并不影响其空间构型的形成，可作为制备针对gP41核心结构空间构型MAb的免疫原。 采用Nsl(L6)e46多肤免疫小鼠制备了针对N51(L6)e46多肤的4株MAb，其中MAb 1 AZ、IA4和IBg针对多肤单体，MAb 3AI针对多肤三聚体。利用ELISA间接夹心法进一步鉴定了MAb的特异性，包被兔抗N36(L6) C34抗体，特异吸附多肤后再检测杂交瘤细胞培养上清，结果显示这4株抗体都不同程度地与兔抗N36(L6) C34捕获的抗原反应，证实它们能特异识别表达多肤，但这4株MAb不与单独的N36或C34多肤片段反应，提示它们 3 第四军医大学硕士学位论文是抗多肤空间构象的MAb。将这4株MAb与MAb NC一1的抗体相对亲和力作比较，其高低依次为NC一1>IB9>IA2>3AI>IA4。位点相加和竞争ELISA法分析其抗原表位，发现这4株MAb与MAbNC一1识别的抗原表位近似，但也存在一些差异。其中识别多肤单体的MAb 1 AZ、1 A4、1 Bg和MAb NC一l识别的抗原表位较接近，而识别多肤三聚体的MAb 3AI与其它4株抗体识别表位差异均相对较大。 上述4株MAb有可能成为筛选抗Hlv多肤及分析gp41表位免疫原特性的有效工具。