【摘 要】
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心脏作为人类最早发育完成的器官,在整个生命过程中发挥重要作用。心脏的发育与形成取决于其细胞增殖、迁移、死亡和分化在时间和空间上的精确调控。其发育过程涉及一系列调控
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心脏作为人类最早发育完成的器官,在整个生命过程中发挥重要作用。心脏的发育与形成取决于其细胞增殖、迁移、死亡和分化在时间和空间上的精确调控。其发育过程涉及一系列调控因子和相关信号通路,这些基因的突变或者异常表达都会导致心脏发育异常。小G蛋白亚家族Rho-GTP酶包括RhoA,Rac1和Cdc42等,它们在真核细胞的细胞进程中发挥广泛作用,如:维持细胞正常生长、增殖、分化、基因调控和细胞命运的决定等。Rho-GTP酶的激活是通过将其结合的GDP转换为GTP而实现,该过程通过特异性的鸟嘌呤核苷酸转换因子GEFs调控。GEFT属于一种鸟嘌呤核苷酸转换因子,能够特异性激活Rho-GTP酶。GEFT是在兴奋性组织如心脏和骨骼肌中广泛表达的一种鸟嘌呤核苷酸转换因子。已知其在许多细胞进程过程中发挥重要调控功能。但是,GEFT在体内的功能并不清楚,因此本实验室构建了基于Cre介导的GEFT在心脏中特异性条件敲除小鼠。GEFT条件敲除小鼠心脏表型正常,表明GEFT对于小鼠的心脏发育是非必须。但是GEFT心脏特异性敲除小鼠在异丙肾上腺素刺激后易于心肌肥大,表明GEFT条件敲除小鼠可能失去了部分抑制心肌病理性肥厚的功能。通过western-blot分析发现Cdc42在GEFT心脏特异性敲除小鼠的心脏中的表达受到轻微的抑制,然而在异丙肾上腺素刺激后该抑制变得较为明显。此外通过对心肌肥厚的相关分子进行RT-PCR,发现GEFT心脏特异性敲除小鼠在病理刺激中p21、SRF和ANF等肥大相关基因出现明显表达差异。我们进一步通过荧光报告系统分析证明p21-luc、ANF-luc、3TP-luc和BRE-luc都能够被GEFT蛋白的表达明显抑制。这些结果共同表明GEFT基因敲除小鼠在异丙肾上腺素刺激后易于心肌肥厚与p21的上调和CyclinA的下调相关,并且还可能涉及其他一些信号通路,如TGF-β信号通路。本文是首次对GEFT在体内的功能进行研究,并探寻了其下游作用机制。
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