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目的肝细胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球最常见恶性肿瘤之一,预后极差。肝癌患者多药耐药(Multiple drug resistance,MDR)的出现仍是困扰其有效治疗的难题。现公认由MDR1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过表达,是导致肝癌MDR形成最重要原因之一;另在HCC发生、发展过程中,炎症性介质核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)异常活化并发挥起重要作用,但与MDR产生、P-gp表达关系及其分子机制有待阐明。为此,本研究分析了肝癌组织P-gp表达、临床病理学特征及对患者生存的影响;以肝癌耐阿霉素HepG2/ADM细胞为模型,以特异性miRNA干扰NF-κB基因转录,观察调控MDR1基因的作用与影响;并探讨了二甲双胍与mi RNA联合干扰HepG2/ADM细胞NF-κB活化,观察下调MDR1/P-gp对肝癌MDR的逆转效果。方法采用免疫组织化学法及特异性抗体检测75份人HCC癌组织及癌周组织P-gp表达;人肝细胞(LO2)及肝癌Hep3B、SMMC-7721、Bel-7404、HepG2和HepG2/ADM用于体外研究;构建4条高特异性pCMV-NF-κB-miRNA,沉默NF-κB基因转录并测序验证;经筛选,采用最有效质粒转染HepG2和HepG2/ADM细胞,以Western blotting测定P-gp及NF-κB变化,以荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测基因表达;以Cell Counting Kit-8(CCK-8)法分析细胞增殖及阿霉素对细胞活力影响;以流式细胞术、Annexin-V-PE/7-ADD双染法观察肝癌细胞周期与凋亡。结果肝癌组织P-gp表达定位于细胞膜和细胞浆,其阳性表达率为70.67%显著高于(χ2=27.312,P<0.001)自身对照的癌周组织28.00%;癌组织P-gp过表达与淋巴结转移(P=0.037),TNM分期(P=0.048)和5年生存率(P=0.007)相关。但未见P-gp表达与患者年龄、性别、AFP水平、门静脉侵犯、HBV感染、肝硬化、分化程度、肿瘤大小及Child分级等明显关联。以阿霉素处理后肝癌Hep3B、SMMC-7721、MHCC-97H、BEL-7404和HepG2细胞后,P-gp表达及NF-κB磷酸化水平均明显增高,其中以HepG2细胞改变最明显。阿霉素处理后HepG2及HepG2/ADM细胞24 h、48 h和72 h时IC50值分别为0.489μM和4.166μM,0.221μM和1.522μM,0.224μM和1.380μM;HepG2/ADM细胞耐药指数(RI)为8.519μM,6.874μM和6.166μM。HepG2/ADM mdr1 mRNA和NF-κB mRNA表达(?ct值)为3.310±0.154和2.580±0.040明显高于(P<0.001)HepG2细胞的0.084±0.038和0.607±0.032。构建特异性最强、抑制效率为71%的pCMV-NF-κB-miRNA1质粒转染细胞。在miRNA1转染后,HepG2/ADM细胞mdr1 mRNA相对表达量2-??ct为0.326±0.011显著低于(t=14.262,P<0.01)阴性对照组0.804±0.057,干扰抑制率为40.55%,伴胞内t-p65、胞核p-p65和P-gp表达及克隆形成能力明显下降(P<0.01),且细胞周期发生G1期阻滞,细胞早期凋亡率为14.1±1.77%。miRNA1转染HepG2和HepG2/ADM细胞48h后,HepG2细胞空白组,阴性对照组及干扰组IC50值分别为0.221μM、0.212μM和0.094μM;HepG2/ADM细胞IC50值分别为1.522μM、1.139μM和0.254μM;干扰组与阴性对照组比较,HepG2细胞下降2.26倍,HepG2/ADM细胞下降4.48倍,miRNA1起显著逆转肝癌MDR作用。HepG2/ADM细胞经二甲双胍预处理后通过NF-κB信号通路下调P-gp表达对阿霉素敏感;miRNA1干扰与二甲双胍同时应用显著下调NF-κB转录和P-gp表达,逆转肝癌MDR具有协同作用,且抑制细胞增殖,细胞周期阻滞并促进细胞凋亡。结论肝癌MDR形成过程中MDR1/P-gp异常表达,特异miRNA干预NF-κB信号通路活化,下调肝癌细胞MDR1/P-gp表达、对化疗药物敏感;如联合二甲双胍更有助于肝癌MDR的逆转。