中药草蔻抗癌活性成分的分离与纯化

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近年以来,癌症已成为对人类生命健康造成威胁的主要疾病之一,现仅排在心脑血管病之后。治疗癌症的传统方法有化学疗法、放射性疗法和手术治疗等,但这些方法对癌症患者多有毒害作用并可能引发并发症,因此寻找新的治疗方法和开发高效低毒的药物来预防和治疗癌症是当下国内外医、药界研究的热点。近几十年来,随着生物学、微生物学和基因学科的发展,已有多种具有抗肿瘤活性的天然产物被发现并批量生产应用于临床。本课题组经前期查阅大量相关文献并经过实验筛选,发现中药草蔻中含有多种活性成分,并发现其中包含具有抗肿瘤活性的有效成分。因此本课题组旨在探究出一套分离纯化中药草蔻中的活性成分的步骤流程,并对分离纯化得到的活性成分进行生物活性的研究。我们利用醇沉、真空正相柱层析(VLC柱)、C18反相柱层析(ODS柱)、凝胶柱层次、薄层色谱法和制备液相等分离方法,从中草药草蔻中分离纯化得到七种化合物,分别为Alpinetin(姜黄素)、Pinocembrin(乔松素),Trans-3,5-dihydroxy-1,7-diphenyl-hept-l-ene(反式-3,5-二羟基-1,7-二苯基庚-1-烯)、Cardamonin(小豆蔻明)、Vanillic acid(香草酸)、P-counmaric acid(对香豆酸)、Biflorin(双花母草素)。化合物中只有对香豆酸和双花母草素为首次在草蔻中分离纯化出的抗癌活性成分。用MTT比色法检测了对香豆酸和双花母草素在体外培养条件下对人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌Bel-7402细胞、人白血病K562细胞和人正常细胞乳腺MCF-10A细胞的增殖抑制率。对实验数据进行多项式拟合得对香豆酸对人乳腺癌MCF-7细胞和人肝癌Bel-7402细胞的半数抑制浓度分别为:0.0146 mg/ml和0.0169mg/ml;双花母草素对人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌Bel-7402细胞和人白血病K562细胞的半数抑制浓度分别为:0.1076 mg/ml、0.3285 mg/ml和0.2270 mg/ml。实验证明对香豆酸对除白血病K562细胞外的其他肿瘤细胞具有较好的抗肿瘤活性,并且对人正常乳腺MCF-10A细胞没有抑制作用;双花母草素具有较好的广谱抗肿瘤活性,尤其对人乳腺癌MCF-7细胞株抑制作用最强,并且对人正常乳腺MCF-10A细胞株无毒害作用。本研究表明,从中草药草蔻中分离纯化得到对香豆酸和双花母草素,研究其体外抗肿瘤活性,为其后续的抗肿瘤机制的研究及药物生产奠定了基础;为类似中药成分的提取提供了工艺基础;本研究同样为抗肿瘤药物的发展和恶性肿瘤的防治提供借鉴,具有重要的意义。
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