目的:肺癌的发病率和死亡率居高不下。此外一些不健康的饮食生活习惯、外界大气环境的污染、职业粉尘及化学元素的接触等危险因素及烟草行业的流行带给我们的影响,都促成着肺癌的发生与形成,时刻威胁着人类的健康。由于肺癌的恶性程度较高,且在疾病早期缺乏特异性的临床症状,不能够做到早发现、早治疗,从而使得病情延误,大部分患者确诊肺癌时已处于晚期阶段,仅以姑息对症治疗为主,从而大大缩短了生存期。因此,肺癌的诊断,甚至是早期筛查诊断就显得尤为重要,为延长患者生存时间、改善患者生活质量提供了重要前提。病理学诊断仍是诊断肺癌的金标准。低剂量CT是目前主要的肺癌筛查手段,但由于其过高的假阳性率、射线辐射效应、过度诊断及高昂的检查费用等一系列问题,能否使患者真正受益还存在争议。近年来,血清肺癌自身抗体的检测手段在肺癌的诊断与筛查中显示出较好的敏感性和特异性,其简便、无创、便于推广的特点提高了受试者的依从性,为肺癌的诊断与筛查提供了新思路。p53基因突变导致的p53蛋白失活是癌症产生的一个重要步骤。p53自身抗体通常针对发生突变的p53基因产物而产生。PGP9.5是表达在神经组织中的一种泛素水解酶,在原发性肺癌和肺癌细胞系中有大量表达。SOX2是一个转录因子,诱导肿瘤癌信号EGFR及BCL2L1,促进肺癌细胞的增殖、存活。GAGE 7属于肿瘤/睾丸抗原,只表达于恶性肿瘤和睾丸组织,具有抗细胞凋亡活性。GBU4-5属于ATP结合RNA解旋酶,在癌变过程中发挥重要作用,同时有肿瘤特异性和免疫原性。MAGE A1属人黑色素瘤抗原家族,只表达于恶性肿瘤和睾丸组织,可能与基因转录调节和癌症的转化或进展有关。CAGE属于DEAD box解旋酶家族,它的表达量与细胞周期有关,在癌细胞中激活ERK和p38蛋白并增加肿瘤细胞的扩散。本文收集了不同类型患者的血清标本,并应用酶联免疫法(ELISA)分组进行血清七种自身抗体(p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE)水平的检测,观察此检测方法对肺癌诊断与筛查的灵敏度和特异度,并对比组间抗体水平的差异性,探讨肺癌自身抗体检测方法在肺癌诊断与筛查中的作用。方法:纳入2016年11月-2017年2月就诊于河北医科大学第四医院的患者共140例,经病理学检查明确组织分型及TNM分期的肺癌,且排除其它脏器恶性肿瘤者88例,设为肺癌组,经影像学或病理学检查排除肺癌及其它脏器恶性肿瘤者47例(包括良性肺部疾病患者34例,健康受试者13例),设为对照组,经病理证实为血管免疫母性T细胞淋巴瘤患者1例、错构瘤患者2例、畸胎瘤患者1例、肉瘤患者1例。全血采集后经过离心收集血清标本,并对其进行分组、编号,用ELISA方法对血清七种自身抗体进行检测:本实验采用的试剂盒将纯化的七个抗原包被到固相板表面。向包被抗原的微孔中分别加入稀释好的血清样本,经孵育使血清样本中的自身抗体与固相载体上的抗原发生特异性结合。洗掉没有结合的样本,加入酶标记抗人IgG抗体(酶结合物)。第二次孵育使酶标记抗人IgG抗体与吸附到固相载体上的自身抗体结合,形成抗原-抗体-酶标抗体复合物,洗掉没有结合的酶标记抗人IgG抗体,加入显色剂底物反应后用酶标仪在450nm波长下测定其吸光度,通过标准曲线计算出自身抗体的相对浓度,并根据“阳性判断值”对检测的抗体浓度做出“阴性”、“阳性”的结果判断,七种自身抗体的正常上限值如下:p53:13.1U/ml;PGP9.5:11.1U/ml;SOX2:10.3U/ml;GAGE7:14.4U/ml;GBU4-5:7.0U/ml;MAGEA1:11.9U/ml;CAGE:7.2U/ml。(注:本数据经过2008例大样本多中心临床试验验证),从而得出此方法的灵敏度和特异度,并对比组间检测阳性率及组间抗体水平的差异性。非正态计量资料组间差异采用Mann-Whitney U检验。组间检测阳性率的比较采用卡方检验。所有检验都为双侧检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1研究对象的临床特征肺癌组纳入88例肺癌患者作为研究对象。其中男性患者56例,占63.6%,年龄范围分布在35-80岁,平均年龄为61.2±9.4岁,年龄≥60岁者55例,占62.5%;腺癌患者54例,占61.4%,鳞癌患者18例,占20.4%,其它类型肺癌患者16例,占18.2%;有吸烟史者42例,占47.7%;Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者53例,占60.2%,Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者35例,占39.8%。良性肺部疾病组纳入34例良性肺部疾病患者作为研究对象。其中男性患者18例,占52.9%;年龄范围分布在25-86岁,平均年龄为54.8±16.2岁,年龄≥60岁者11例,占32.4%;有吸烟史者10例,占29.4%;肺炎患者16例,占47.0%,肺结核患者9例,占26.5%,慢性阻塞性肺疾病患者5例,占14.7%,其它类型患者4例,占11.8%。健康人群组纳入13例健康受试者作为研究对象。其中男性患者6例,占46.2%;年龄范围分布在39-76岁,平均年龄为56.5±11.5岁,年龄≥60岁者4例,占30.8%。另有血管免疫母性T细胞淋巴瘤患者1例、错构瘤患者2例、畸胎瘤患者1例、肉瘤患者1例。2肺癌组与对照组七种自身抗体检测阳性率的比较:肺癌组的p53和GBU4-5抗体检测的阳性率均高于对照组(p53:17.0%vs4.3%,P<0.05;GBU4-5:15.9%vs0%,P<0.05)。其余五种自身抗体在肺癌组与对照组之间的检测阳性率均无统计学差异(P>0.05)。3七种自身抗体单独检测对肺癌筛查的灵敏度、特异度、诊断符合率、正确指数:灵敏度:9.1%-17%;特异度:89.4%-100%;诊断符合率:38.5%-45.2%;正确指数:0.03-0.16。4自身抗体联合检测对肺癌筛查的灵敏度、特异度、诊断符合率、正确指数:p53与GBU4-5抗体联合检测的灵敏度为27.2%,特异度为95.7%,诊断符合率为51.1%,正确指数为0.23;p53、GBU4-5与MAGEA1抗体联合检测的灵敏度为34.1%,特异度为91.5%,诊断符合率为54.1%,正确指数为0.26;七种自身抗体联合检测的灵敏度为46.6%,特异度为70.2%,诊断符合率为54.8%,正确指数为0.17。5七种抗体联合检测对不同类型肺癌筛查的灵敏度及特异度:七种抗体联合检测对肺腺癌诊断的灵敏度为35.2%,特异度为70.2%;对肺鳞癌诊断的灵敏度为72.2%,特异度为70.2%。6肺癌组与对照组七种自身抗体表达水平的比较:肺癌组p53抗体表达水平高于对照组(2.30(0.83,7.18)vs1.60(0.20,2.80),P<0.05)。其余六种自身抗体在肺癌组与对照组之间的表达水平无统计学差异(P>0.05)。7不同病理类型肺癌与对照组七种自身抗体表达水平的比较:7.1肺腺癌与肺鳞癌患者血清七种自身抗体表达水平的比较:肺鳞癌患者PGP9.5抗体表达水平高于肺腺癌患者(5.05(2.13,19.85)vs2.45(1.60,3.73),P<0.05)。其余六种自身抗体在肺腺癌与肺鳞癌患者之间的表达水平均无统计学差异(P>0.05)。7.2肺腺癌患者与对照组血清七种自身抗体表达水平的比较:七种自身抗体在肺腺癌患者与对照组之间的表达水平均无统计学差异(P>0.05)。7.3肺鳞癌患者与对照组血清七种自身抗体表达水平的比较:肺鳞癌患者血清p53、PGP9.5、MAGEA1抗体的表达水平均高于对照组,差异具有统计学意义(p53:2.95(1.63,19.70)vs1.60(0.20,2.80),P<0.05;PGP9.5:5.05(2.13,19.85)vs2.60(1.90,4.00),P<0.05;MAGEA1:2.15(0.20,13.58)vs0.50(0.10,1.70),P<0.05)。其余四种自身抗体在肺鳞癌患者与对照组之间的表达水平均无统计学差异(P>0.05)。8Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者与Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者血清自身抗体表达水平的比较:Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者血清PGP9.5、GBU4-5、CAGE抗体的表达水平均高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者,差异具有统计学意义(PGP9.5:3.10(2.30,18.10)vs2.30(1.55,3.75),P<0.05;GBU4-5:1.50(0.20,22.00)vs0.40(0.00,1.15),P<0.05;CAGE:1.70(1.20,8.10)vs1.40(0.20,2.05),P<0.05)。其余四种自身抗体在Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期患者之间的表达水平均无统计学差异(P>0.05)。结论:1单一抗体检测(p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE)对肺癌筛查的特异度较高(89.4%-100%),灵敏度较低(9.1%-17.0%),尚不能满足作为肺癌筛查的指标。2两个(p53与GBU4-5)或三个(p53、GBU4-5与MAGEA1)肺癌自身抗体联合检测较单一抗体检测可以提高检测的灵敏度。3七种血清自身抗体联合检测对肺癌筛查的灵敏度为46.6%,特异度为70.2%,推荐七种自身抗体联合检测技术应用于肺癌的临床筛查工作中。4 p53、PGP9.5、MAGEA1抗体可作为肺鳞癌与良性肺疾病的鉴别指标。5 PGP9.5、GBU4-5、CAGE抗体的表达水平与肿瘤负荷相关。