内质网应激在鸡小白卵泡闭锁中的作用研究

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在鸡卵泡的等级发育过程中,大量小白卵泡(SWFs)因细胞凋亡发生闭锁,极大地减少了进入等级发育的卵泡的数量,导致鸡产蛋量下降。因此,探究SWFs闭锁的原因对提高鸡产蛋量极为重要。研究表明,持续的内质网应激(ERS)可引起细胞凋亡,而ERS是否能引起鸡SWFs闭锁尚不清楚。本研究以40周龄(产蛋高峰期)罗曼粉蛋鸡为研究对象,一方面探究鸡闭锁小白卵泡(ASWFs)是否发生ERS,另一方面通过建立体外衣霉素(Tum)诱导ERS模型探究ERS在鸡SWFs闭锁中的作用,并利用该模型探究芒果苷(Man)对ERS引起的卵泡闭锁的缓解作用。主要研究结果如下:(1)鸡SWFs闭锁发生严重的ERS与SWFs相比,ASWFs细胞凋亡水平显著升高,细胞增殖率显著降低,且ASWFs的颗粒细胞(GCs)内质网发生肿胀、扩张以及空泡化,ASWFs的ERS相关蛋白和基因的表达水平显著上升。以上结果表明在鸡ASWFs中发生ERS。(2)ERS可诱导体外鸡SWFs闭锁与对照组相比,去血清组和Tum处理组显著促进SWFs细胞凋亡,抑制细胞增殖,并且Tum对SWFs的作用呈剂量依赖性增加;去血清组和Tum处理组均上调ERS相关蛋白和基因的表达水平。且5μg/m L Tum处理与无血清组结果相似,是建立体外Tum诱导ERS模型的最佳浓度。此外,透射电镜结果显示,去血清组和5μg/m L Tum组的GCs中均发生内质网肿胀、扩张和空泡化。以上研究结果表明,ERS可诱导体外培养的SWFs闭锁,且5μg/m L Tum处理SWFs可作为体外诱导ERS模型用于后续实验。(3)Man可缓解ERS引起的SWFs闭锁添加Man可改善ERS造成的SWFs形态损伤,Man在0-60μM浓度对ERS诱导的SWFs细胞凋亡率升高的抑制作用呈剂量依赖性增加;Man在0-60μM浓度对ERS诱导的SWFs细胞增殖率降低的缓解作用呈剂量依赖性增加,60μM Man处理可显著促进细胞增殖。与Tum组相比,添加60μM Man可显著下调ERS通路相关蛋白和基因的表达水平,且单独添加Man对SWFs无不良影响。以上结果表明,Man通过抑制ERS从而缓解体外SWFs闭锁,60μM Man处理是缓解体外ERS诱导SWFs闭锁的最佳浓度。综上所述,本研究结果表明,在鸡SWFs闭锁的过程中发生ERS;通过建立体外Tum诱导SWFs ERS模型发现ERS是导致鸡卵泡闭锁的原因之一;Man可通过抑制ERS从而缓解体外SWFs闭锁。这些结果为拓展对鸡卵泡闭锁的认识及探寻预防卵泡闭锁的措施提供理论依据。
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