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本论文通过研究与异色瓢虫热胁迫耐受性密切相关的热休克蛋白70(HSP70),比较了不同发育时期、不同性别的异色瓢虫之问热胁迫耐受性的差异。主要结果如下:
(1)首次成功克隆出异色瓢虫HSP70基因的cDNA全长序列。该序列全长2200bp,含有1956 bp的完整开放阅读框,编码一个651氨基酸的蛋白,计算分子量为70 kDa。同源序列搜索结果表明,异色瓢虫HSP70与其它真核生物的HSP/HSC70有着较高的序列同源性(85﹪-93﹪)。其中与赤拟谷盗(Triboliumcastaneum)热休克蛋白70(HSP70)同源性最高,达到93﹪。
(2)运用实时定量RT-PCR体系比较和分析了异色瓢虫在不同发育时期HSP70的组成型表达情况。在常温下,不同发育时期异色瓢虫体内均有HSP70的转录发生,但不同时期转录水平相差很大。其中,HSP70基础转录水平最高的是四龄幼虫,最低的是三龄和蛹。雌雄成虫基础转录水平无明显差异。异色瓢虫HSP70随发育期的波动表明,在异色瓢虫的发育过程中,异色瓢虫的HSP70可能起到十分重要的作用,并很可能是参与新生蛋白质的折叠与转运。
(3)运用实时定量RT-PCR体系比较了不同热胁迫温度对不同性别异色瓢虫HSP70表达的影响。不同性别的异色瓢虫在38℃下HSP70的表达均出现轻微上调,44℃时达到最大,超过基础转录水平的2倍,并有继续增加的趋势。这表明,异色瓢虫的雌成虫对热胁迫较雄虫敏感。
(4)运用实时定量RT-PCR体系比较了异色瓢虫四龄幼虫高温(40℃)下胁迫不同时间内HSP70表达情况。四龄幼虫对40℃高温胁迫并不敏感,在胁迫后1-5小时才出现明显的HSP70转录增加。结果表明,异色瓢虫四龄幼虫可能具有较强的热胁迫耐受能力,而体内高浓度的HSP70对其获得性耐受性的增加起到十分重要的作用,其作用机理可能是参与修复细胞内受损的变性蛋白。