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目的:脓毒症(sepsis)在并发急性肾功能衰竭(ARF)的情况下,病死率可高达70%。脓毒症时,内毒素诱导多种细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,大量释放一氧化氮(NO),介导组织损伤。NO和iNOS与肾脏的病理生理过程关系及其密切。血必净注射液能抑制炎症因子的释放,保护和修复应激状态下受损的脏器。本研究通过复制大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)模型,观察同等时间点、应用相同剂量血必净对大鼠血浆及肾脏组织NO和iNOS的变化的影响,并结合肾脏形态学及超微结构的改变,探讨血必净在脓毒症中的作用,为临床防治脓毒症ARF提供新的思路。
方法:脓毒症动物模型的制备选用经典的盲肠结扎穿孔(CLP)法。健康SD大鼠40只,随机分为4组:①模型组(n=12):制模后即刻经尾静脉注射生理盐水4ml/kg;②血必净组(n=12):制模后即刻经尾静脉注射血必净4ml/kg;③正常对照组(n=8):不给予任何处理,直接处死;④假手术组(n=8):只开关腹,不做CLP。除正常对照组外,各组均于术后6小时经颈动脉取血,留取血浆于-70℃冻存,并留取右肾组织迅速冻于液氮中,进行血浆及肾组织匀浆NO含量和iNOS活性的测定。留取左侧。肾组织,4%多聚甲醛固定,采用HE染色法光镜观察肾脏形态学改变;同时将肾组织制成1mm3大小,4%戊二醛固定应用透射电镜观察肾脏的超微结构。用SPSS11.5统计分析软件进行统计学分析,数据以均数±标准差(-x±s)表示,各组均数的比较行单因素方差分析(ANOVA),P<0.05为差异有统计学意义。结果:
1.实验动物一般情况的观察:假手术组大鼠术后清醒较快,活动灵活,自由饮水,剖腹未见腹水,无恶臭。模型组动物术后苏醒延迟,精神萎靡,活动迟缓,竖毛,呼吸急促,剖腹可见淡血性腹水多,恶臭,肠管水肿,有的盲肠末端发黑。血必净组动物与模型组相比表现较轻。
2.肾组织形态学变化:假手术组肾小球、肾小管结构正常;模型组肾小球皱缩明显,肾小管上皮细胞变性、坏死脱落,肾小管囊腔扩张,管型形成,肾间质大量炎性细胞浸润;血必净组肾小球、肾小管变化较模型组减轻。
3.肾皮质超微结构变化:假手术组肾小球滤过膜完整,基底膜厚度均匀,上皮细胞足突排列有序,内皮细胞形态正常,可见窗孔;近曲小管上皮细胞刷状缘绒毛排列整齐,染色质分布均匀,线粒体结构正常;模型组肾小球基底膜部分增厚呈驼峰状,部分足突细胞融合,部分血管内皮细胞增生变厚;近曲小管游离面微绒毛数量明显减少,稀疏,排列不规则,线粒体部分或大部分嵴、少部分膜融合或消失,粗面内质网轻度扩张,脱颗粒现象明显;血必净组肾小球及近曲小管超微结构改变均较脓毒症组轻。
4 各组大鼠血浆NO含量的比较:模型组血浆NO含量(94.00±15.18umol/L)明显高于正常对照组(52.52±13.61umol/L,P<0.01)及假手术组(51.49±19.00umol/L,P<0.01);血必净组血浆NO含量(77.16±
14.49umol/L)明显低于模型组(P<0.01);正常对照组与假手术组相比无统计学差异(p>0.05)。 5 各组大鼠血浆iNOS活性的比较:模型组血浆iNOS活性(6.194±0.819U/ml)明显高于正常对照组(3.690±0.888U/ml,P<0.01)及假手术组(3.256±0.997U/ml,P<0.01);血必净组血浆iNOS活性(4.478±0.931U/ml)明显低于模型组(P<0.01);正常对照组与假手术组相比无统计学差异(P>0.05)。
6 各组大鼠肾组织NO含量的比较:模型组肾组织NO含量(0.497±0.066umol/gprot)明显高于正常对照组(0.322±0.069umol/gprot,P<0.01) 和假手术组(0.348±0.037umol/gprot,P<0.01);血必净组肾组织NO含量(0.428±0.028umol/gprot)明显低于模型组(P<0.05);正常对照组与假手术组相比无统计学差异(p>0.05)。
7 各组大鼠肾组织iNOS活性的比较:模型组肾组织iNOS活性(0.197±0.016U/mgprot)明显高于正常对照组(0.157±0.010U/mgprot,P<0.01)和假手术组(0.1 59±0.015U/mgprot,P<0.01);血必净组肾组织iNOS活性(0.180±0.017U/mgprot)明显低于模型组(P<0.05);正常对照组与假手术组相比无统计学差异(P>0.05)。
结论:
1.NO和iNOS在脓毒症大鼠肾损伤发病过程中发挥了重要的作用。
2.血必净干预治疗可使血浆及肾组织中NO含量和iNOS活性下降,并可使肾脏损伤减轻。
3.血必净对脓毒症大鼠肾脏具有保护作用,其机制可能是通过抑制iNOS介导的NO生成实现的。