【摘 要】
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抗生素是医药行业中使用极为普遍的药物,在人类健康、农业、畜牧业、渔业等行业中都有广泛的应用。已发现的抗生素大多是由链霉菌产生的,属于其次生代谢产物。黑莫他丁和力达霉
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抗生素是医药行业中使用极为普遍的药物,在人类健康、农业、畜牧业、渔业等行业中都有广泛的应用。已发现的抗生素大多是由链霉菌产生的,属于其次生代谢产物。黑莫他丁和力达霉素是不同种链霉菌产生的抗生素,它们不仅具有抗菌活性,还具有一定的抗癌活性。虽然现阶段它们还没有实际的应用,但是对它们的研究已经越来越深入。HmtN和SgcE10是这两类抗生素生物合成中比较重要的酶:HmtN是羟基化酶,负责黑莫他丁羟基哌嗪酸残基C-3位上γ-羟基基团的结合,形成黑莫他丁单体;SgcE10是硫酯酶,可能负责力达霉素核心结构的合成。同源序列比对显示,HmtN属于细胞色素P450家族蛋白,SgcE10属于Hot-dog家族蛋白。 在本研究中,基因hmtN和sgcE10被连接在载体pET28a上构建新的载体,然后将构建的载体分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,并诱导它们异源表达,随后通过亲和层析、凝胶层析等步骤,获得了大量高纯度的蛋白质HmtN和SgcE10。接着,通过多种结晶试剂盒的筛选和部分条件的优化,得到了可用于X-射线衍射的晶体,通过衍射得到数据,然后运用一系列晶体学软件处理,最后获得了两种蛋白质的结构数据。HmtN晶体的最高分辨率为2.36?,空间群为P212121,晶胞参数为a=56.14,b=72.29,c=103.29,α=β=γ=90.00,HmtN的结构为单体。SgcE10晶体的最高分辨率为2.90?,空间群为P1211,晶胞参数为a=58.47,b=182.32,c=61.38,α=90.00,β=94.73,γ=90.00,SgcE10的结构是八聚体。 对HmtN和SgcE10结构的研究,将有助于揭示它们结构与功能的关系以及催化抗生素合成的机制,并为其他类似蛋白质结构和功能的研究提供参考。
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