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目的: 1.检测125例T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者中IL-7R、NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6的发生率以及IL-7R突变的位点,通过对IL-7R、NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6基因突变序列的分析从而研究IL-7R、NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6基因突变的位点及插入缺失的类型,探讨IL-7R、NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6基因突变在T-ALL患者中的特征及临床意义。 2.调查血液病患者9号染色体倒位(pericentric inversion of chromosome9,inv(9))的发生率,研究inv(9)血液病患者融合基因检出情况;分析比较inv(9)血液病患者和非inv(9)血液病患者造血干细胞移植后中性粒细胞和PLT等骨髓造血恢复特征。 方法: 第一部分收集125例T-ALL患者骨髓或者外周血细胞。利用直接短期培养法制备染色体悬液,采用R显带进行核型分析。利用DNA抽提试剂盒抽提基因组DAN,应用聚合酶连反应扩增基因组DNA,同时应用PCR产物双向测序的方法检测125例T-ALL患者IL-7R基因突变的发生情况。 第二部分1.染色体核型分析:取患者肝素抗凝外周血5ml,培养72h后常规制备染色体,采用R显带技术,每例至少分析10-20个分裂象。核型异常的描述按人类细胞遗传学国际命名体制[ISCN2013]。 2.用PCR技术对实验对象进行PML-RARα、BCR-ABL1、AML-ETO、EVI1、CBFβ-MYH11、MLL-AF6、AML-AF4、SET-NUM214、SIL-TALI、IgH重排,TCR重排和BCL1-IgH等融合基因的检测。 结果: 第一部分 (1) IL-7R基因在T-ALL患者中的突变率为5.60%(7/125),检测到突变的是IL-7R的6号外显子,5号外显子未发现基因突变。在7例发生IL-7R突变的T-ALL患者中成人6例,儿童1例;男性4例,女性3例。IL-7R突变的类型是开放阅读框的插入和缺失,突变的位置位于IL-7R跨膜区的P240–S246序列。7例发生IL-7R突变的患者同时检测到NOTCH1基因突变的有2例,同时检测到PFH6基因突变的有1例。 (2)WBC在FBXW7和PHF6突变与未突变者中差异有统计学意义(P均<0.05), LDH在WT1和PHF6突变与未突变者中差异有统计学意义(P均<0.05),骨髓原始细胞在IL-7R突变与未突变者中差异有统计学意义(P<0.05),其他指标在各基因突变与未突变者中均无统计学意义(P均>0.05)。 (3)125例T-ALL患者中IL-7R、NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6基因突变率分别为5.6%、44.0%、9.6%、3.2%和12.8%。125例患者中,ALL-1、ALL-2、ALL-3分别为42、52和31例。IL-7R、NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6在ALL-1中的突变率分别为4.76%、42.9%、7.14%、2.38%和16.67%;在ALL-2中的突变率分别为3.85%、44.2%、13.5%、1.92%和11.54%;在ALL-3中的突变率分别为9.68%、45.20%、6.45%、9.68%和9.68%。IL-7R、NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6在69例正常染色体核型的突变率分别为5.80%、46.40%、11.59%、4.35%和13.04%;在56例异常染色体核型的突变率分别为5.36%、41.1%、7.14%、3.57%和12.50%。 第二部分 (1)血液病患者inv(9)的总检出率为1.44%(571/39589);inv(9)在AML和非AML患者的检出率分别为3.28%(172/5251)和1.18%(399/34338),p<0.01,差异有统计学意义;inv(9)在AA和非AA患者的检出率为别为3.64%(43/1181)和1.39%(528/38408),p<0.01,差异有统计学意义。 (2)inv(9)患者检出PML-RARα、BCR-ABL1、AML-ETO、EVI1、CBFβ-MYH11、MLL-AF6、AML-AF4、SET-NUM214、SIL-TALI、IgH重排,TCR重排和BCL1-IgH等多种融合基因。 (3)inv(9)患者造血干细胞移植后中性粒细胞计数(absolute neutrophil count, ANC)>0.5*109/l是在移植后12天,PLT>20*109/l是在移植后16天;非inv(9)患者造血干细胞移植后ANC>0.5*109/l是在移植后12天,PLT>20*109/l是在移植后13天。 结论: 1、IL-7R突变可能在T-ALL的发生和发展中有重要的作用,NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6基因突变也可能与T-ALL有关。 2、性别、T-ALL亚型、细胞遗传学分类在IL-7R、NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6突变与未突变者差异均无统计学意义。 3、IL-7R、NOTCH1、FBXW7、WT1和PHF6突变的分子靶点使新的靶向治疗药物将成为可能。针对这些基因突变的新的靶向治疗具有广阔的临床应用前景。 4、inv(9)可以发生在各种血液病中;inv(9)在AML和AA患者中的检出率高于正常人的发生率,在其他类型血液病的检出率与普通人群相似。 5、inv(9)血液病患者和非inv(9)血液病患者造血干细胞移植后ANC>0.5*109/l所需的时间几乎相等,而inv(9)血液病患者PLT恢复所需的时间比非inv(9)血液病患者稍长。