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CD4+CD25+T淋巴细胞是调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)亚群之一,在健康人体中占CD4+T淋巴细胞总数的5%～10%。研究显示,Foxp3是目前公认的CD4+CD25+Treg的特异性标志,在一定程度上可反映CD4+CD25+Treg的水平和功能活性。它参与了免疫耐受的分子机制,对正常免疫功能的维持及调控至关重要。人体内CD4+CD25+T细胞的数量或功能的改变与自身免疫疾病密切相关。有证据表明,SLE患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞较正常人明显减少。从生物学活性来说,CD4+CD25+T调节细胞至少分泌两类抑制性细胞因子：IL-10和TGF-β。研究发现,TGF-β可诱导外周初始CD4+CD25+T细胞表达Foxp3,能使初始CD4+CD25+T细胞转化为具有调节活性的CD4+CD25+Treg,可通过抑制免疫效应细胞的增殖、分化以及抑制细胞因子的产生而发挥免疫抑制作用。IL-10具有免疫调节作用,可通过直接和间接机制明显降低抗原特异性T细胞增殖,还能有效抑制IL-12的产生,而IL-12是Th1细胞分化的关键因子。此外,IL-10还以阻止TCR介导的CD4+T细胞活化。CD4+CD25+T调节细胞作为一群机体免疫应答的重要细胞,本身也存在一个被调节的过程,CD4+CD25+T调节细胞程序性细胞死亡(PCD)是对自身的调节机体免疫应答过程中免疫细胞自稳调节的重要机制之。根据形态学可以把程序性细胞死亡分为自噬、凋亡、胀亡等。重楼,又称七叶一枝花,它的主要有效成分是甾体皂甙,包括重楼皂甙Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ等。前期实验证明重楼能明显降低肾组织FNmRNA水平,有利于减轻肾脏病变。文献报道,重楼皂甙有增强小鼠的体液免疫和细胞免疫的作用,重楼皂甙Ⅱ是作用较强的免疫调节剂。但关于重楼皂甙如何调节免疫,尤其是对肾脏病的影响,目前研究甚少。本实验通过观察重楼皂甙Ⅱ干预后健康人和LN患者外周血CD4+CD25+Treg的程序性细胞死亡方式的改变及其分泌的细胞因子TGF-β、IL-10水平和Foxp3表达水平的变化,探讨CD4+CD25+Treg在LN发病机制中的免疫调节作用。目的：分离健康人和LN患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞,予重楼皂甙Ⅱ干预,并与地塞米松对比,通过对其自噬、凋亡、胀亡这三种细胞死亡方式、其表面的Foxp3的表达和其分泌的细胞因子TGF-β、IL-10水平变化的研究,来了解CD4+CD25+T调节细胞在LN肾炎发病中的作用以及重楼皂甙Ⅱ治疗LN的可能机制。方法：经密度梯度法、尼龙棉柱法和免疫磁珠分离法分离健康人和LN患者外周血淋巴细胞,并用流式细胞术检测分离所得细胞纯度。考察重楼皂甙Ⅱ的最大无毒浓度,并用MTT法检测细胞活力。将分离所得CD4+CD25+T调节细胞和CD4+CD25+T淋巴细胞,分重楼皂甙Ⅱ组(不同浓度)和DXM对照组培养后,观察细胞电镜形态学,并用流式细胞仪检测自噬、凋亡、胀亡水平和检测Foxp3的表达,用ELISA法检测细胞培养上清液细胞因子TGF-β.IL-lO的水平。结果：1.健康人外周血T淋巴细胞纯度为75.4%～98.3%,CD4+T淋巴细胞的纯度为85.54～97.5％,CD4+CD25+T淋巴细胞的纯度为78.57～91.06％,CD4+CD25-T淋巴细胞纯度为75.05～85.02%。2.LN患者外周血T淋巴细胞纯度为73.5％～94.1％,CD4+T淋巴细胞纯度为81.4～91.2％,CD4+CD25+T淋巴细胞的纯度为73.57～88.6％,CD4+CD25-T淋巴细胞纯度为72.7～80.6%。3.10μg/ml的重楼皂甙Ⅱ在72h时能促进健康人和LN患者外周血CD4+CD25+T调节细胞自噬、凋亡的增加,对于胀亡则无明显变化。通过相关性分析显示CD4+CD25+T调节细胞的三种细胞死亡方式在重楼皂甙Ⅱ作用后,各自独立变化,未显示显著相关性。4.10μg/ml的重楼皂甙Ⅱ不能诱导健康人和LN患者外周血CD4+CD25-T淋巴细胞自噬、凋亡、胀亡的增加,三者在重楼皂甙Ⅱ作用后,各自独立变化,未显示显著相关性。5.健康人和LN患者外周血CD4+CD25+T调节细胞能够分泌TGF-β.IL-10,予重楼皂甙Ⅱ干预后,分泌更加旺盛。健康组和LN患者组比较,无显著性差异。CD4+CD25-T淋巴细胞分泌TGF-β.IL-10的能力远低于CD4+CD25+T调节细胞,且予重楼皂甙Ⅱ干预后,分泌未见明显增加。健康组和LN患者组比较,无显著性差异。6.健康人和LN患者外周血CD4+CD25+T调节细胞在重楼皂甙Ⅱ干预下凋亡率与TGF-β、IL-10分泌及Foxp3表达呈显著负相关。7.重楼皂甙，Ⅱ未能改变健康人和LN患者外周血CD4+CD25+T调节细胞Foxp3表达强度,且TGF-β、IL-10分泌与Foxp3表达呈显著正相关。结论：1.免疫磁珠法可成功分离CD4+CD25+T淋巴细胞,纯度>70%。2.重楼皂甙Ⅱ能促进健康人和LN患者外周血CD4+CD25+T调节细胞自噬、凋亡的增加,不能促进胀亡的增加。3.重楼皂甙Ⅱ干预后健康人和LN患者外周血CD4+CD25+T调节细胞三种细胞死亡方式各自独立变化,未显示显著相关性。4.健康人和LN患者外周血CD4+CD25HT调节细胞的TGF-β、IL-10分泌均较旺盛,且重楼皂甙Ⅱ干预后分泌增加。5. Foxp3的表达强度组间无明显变化,TGF-β、IL-10分泌与Foxp3的表达呈显著正相关。6.凋亡与Foxp3的表达和TGF-β、IL-10分泌之间呈显著负相关。