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目的：在活细胞内，通过准确而有效的方法，将ki67high和ki67low/-两个细胞亚群区别并分选出来，为研究两者功能提供稳定的体系。方法：构建ki67启动子（-1182～+575）驱动绿色荧光蛋白（GFP）表达的慢病毒系统，包装病毒后感染肿瘤细胞；将阳性克隆注射于裸鼠皮下，4-6周后处死裸鼠收获移植瘤，处理成单细胞悬液后用流式细胞仪分选出GFP+和GFPlow/-的细胞，再鉴定其ki67的表达，检测GFP能否反映ki67内源性表达。结果:成功构建了ki67启动子驱动GFP表达的慢病毒系统；通过该系统分选的GFP+表达较高的ki67和各种cyclins，GFPlow/-的细胞低或不表达ki67和cyclins。结论：ki67启动子驱动GFP表达的慢病毒系统能够有效的分选出ki67+和ki67low/-两个细胞亚群。目的：比较ki67low/-和ki67+两个细胞亚群在成瘤能力，自我更新能力，转移能力，耐化疗能力等肿瘤干细胞相关特性方面的差异。方法：通过第一部分中的方法，将分选得到的ki67low/-（GFPlow/-）和ki67+（GFP+）进行体外的克隆形成试验（clone formation assay），连续成球试验（serial sphereformation assay）以及体内的有限稀释试验（limited dilution assay）比较ki67low/-和ki67+两个细胞亚群在成瘤能力和自我更新能力；通过脾包膜下注射肿瘤细胞观察肝转移比较二者转移能力；通过腹腔注射5-Fu观察皮下移植瘤的生长，比较二者体内耐化疗的能力。结果：ki67low/-（GFPlow/-）较ki67+（GFP+）具有更强的成瘤和自我更新能力；其肝转移的能力也更明显；对5-Fu的不敏感。结论：ki67low/-表现出更显著的肿瘤干细胞相关特性。目的：证实ki67low/-细胞在临床结直肠癌中的存在，探讨其与肿瘤的病理即病人预后的关系。方法：收集2005年胃肠外科所有stage III的结直肠癌原位肿瘤标本，免疫组化染色ki67并统计其表达，收集相关临床信息，追访病人生存时间，揭示ki67的表达与肿瘤病理和病人预后的关系。结果：临床结直肠癌中确实存在ki67表达异质性的细胞；在stage III的结直肠癌中，ki67表达与病人的性别，年龄和肿瘤性质无关，低表达ki67的肿瘤分化越差，发生转移可能性越高，低表达ki67的肿瘤病人5年生存时间更短。结论：ki67low/-的细胞在临床结直肠癌中存在，低表达ki67的肿瘤病人预后较差