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超氧化物歧化酶(SOD)广泛存在于动、植物及微生物中,其主要功能是参与生物活性氧的代谢过程,SOD及其模拟化合物一直倍受化学、生物学、医学等交叉学科的关注,成为了研究热点。根据所含金属辅机的不同,SOD可分为Cu/ZnSOD、 Mn-SOD、 Fe-SOD、 Ni-SOD,不同类型超氧化物歧化酶在理化酶学性质上存在一定差异,如分子量、热稳定性及对某些化学试剂的敏感程度。本文综述了超氧负离子自由基的产生、反应活性和对生物体的危害,以及SOD的种类、催化机理及研究现状;研究了CAT与Cu/ZnSOD、异烟肼(NH)与Cu/ZnSOD及α-酮异戊酸脱氢酶与Mn-SOD的相互作用。主要研究内容:(1)过氧化氢酶与铜锌超氧化物歧化酶的相互作用本文利用邻苯三酚法测Cu/ZnSOD活性和钼酸铵法测CAT活性的方法研究了不同物理化学因素对CAT和Cu/ZnSOD活性的影响,并研究了两种酶间的协同保护作用。结果表明,CAT对Cu/ZnSOD的耐酸碱性、抗H2O2破坏以及在乙醇水溶液中都有一定的协同保护作用,但CAT降低了Cu/ZnSOD在高温下的热稳定性;研究超氧负离子(·O2-)对CAT活性的影响表明,·O2-对CAT活性有一定的损伤作用,且Cu/ZnSOD可以保护CAT免受·O2-的损伤。(2)异烟肼与铜锌超氧化物歧化酶的相互作用利用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法研究了异烟肼(NH)与铜锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)的结合作用及其对Cu/Zn-SOD活性的影响。结果表明,NH与Cu-ZnSOD的结合行为使Cu-ZnSOD的内源荧光猝灭。通过猝灭常数、结合常数和结合位点的计算,证明荧光猝灭机理符合静态机制;NH和Cu-ZnSOD形成了1:1稳定复合物,且复合物的形成不影响酶的活力。NH本身具有一定的超氧负离子清除能力。考察不同温度下的猝灭作用,进一步证实结合作用主要受范德华力和氢键驱动。(3)锰超氧化物歧化酶的酶学特性及其与α-酮异戊酸脱氢酶的相互作用利用邻苯三酚法测定了不同温度、不同缓冲体系、不同体积比的乙醇水溶液对Mn-SOD活性的影响;研究了Mn-SOD在不同pH值的硼酸缓冲溶液中的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱;利用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法研究了α-酮异戊酸脱氢酶与Mn-SOD相互作用。结果表明:与Cu/ZnSOD相比,Mn-SOD的热稳定性更强(90℃时活性最强)、pH稳定范围更宽,pH=11时,活性最强;不同pH介质影响的主要是Mn-SOD中色氨酸残基的荧光;α-酮异戊酸脱氢酶与Mn-SOD结合,使Mn-SOD活性明显增强。