木霉菌-油菜联合吸附重金属技术构建与作用机理初步研究

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木霉(Trichoderma spp.)不仅是一类重要的植物病害的生防真菌,同时还证明是降解和转化环境污染物,如重金属,DDT等的环境微生物。油菜(Brassica napus)是我国的主要农作物之一,其中甘蓝型油菜在我国南方地区广泛种植,已有研究表明:甘蓝型油菜也具有修复Cd污染土壤的能力。然而无论是单一的木霉菌,还是单一的油菜本身在吸收重金属的能力均有一定的局限性,因此如何通过木霉菌与油菜的联合作用提高从土壤中吸收重金属的效率,具有重要意义。以往少数报道是利用野生木霉与油菜互作提高吸收重金属的效率,尚无研究利用木霉菌REMI(限制性内切酶介导的基因整合)突变株与油菜的联合作用,而木霉菌突变株可为今后扩大与油菜亲和互作的改良和高效筛选提供了可能。本试验拟筛选可吸附土壤重金属Cd的甘蓝型油菜品种和木霉菌突变株,进而组配修复重金属污染土壤的木霉-油菜共生体。木霉菌除可促进油菜植株吸附重金属Cd外,还能使油菜免受油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的侵染。通过人工接种重金属Cd的盆栽试验,首先评价了上海地区种植的12个甘蓝型油菜品种对镉的耐受和富集能力,从中筛选出了对土壤中Cd有明显耐受、富集作用,适合长三角地区种植和土壤修复的油菜品种--沪油20。沪油20油菜品种可以做为与木霉菌联后修复Cd污染土壤的候选植物。然后,从REMI突变株中筛选出2株对重金属Cd具有较高耐受和吸附能力的菌株P6和H6。拮抗性和促进生长试验表明:由P6和H6制备的土壤修复剂对油菜沪油20幼苗生长有明显刺激作用,同时对菌核病菌生长也有明的抑制作用,盆栽试验进一步证明这两个突变株均能明显防治油菜菌核病,其中P6和H6复合处理防效在80%以上。木霉菌突变株-油菜吸附重金属的机理初步研究表明:木霉菌突变株处理后镉在油菜细胞壁和叶绿体内均有吸附,但在细胞壁上的吸附增加较明显,另外发现由于木霉菌刺激油菜过量吸附镉,可导致油菜叶片细胞核破坏。蛋白质组学的初步研究证明了REMI是一种可以使木霉菌获得高耐受镉能力突变株的有效方法。通过检测沪油20在两菌株不同组合制备的土壤修复剂处理下,株高,干重,相对生物量及净化率的变化,确定木霉突变株-油菜最佳组合为P6+H6:油菜沪油20,该组合作用可明显提高沪油20对Cd污染土壤的净化率,同时抵抗油菜菌核病菌的侵染,确保木霉-油菜共生体在修复污染土壤过程中的安全生长,同时为植物-微生物共同作用修复农田重金属污染土壤机理及其应用技术奠定基础。
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